[发明专利]一种通过核桃叶片气孔密度鉴别核桃抗病性的方法

说明书

本发明公开了一种通过核桃叶片气孔密度鉴别核桃抗病性的方法，属于植物种植技术领域，本发明采用发育完全的核桃叶片，通过显微观测叶片气孔的数量，计算出气孔密度，根据气孔密度与发病率正相关性，鉴别核桃抗病性；通过本发明的技术鉴别核桃抗病性的同时，进行杂交育种过程中的早期选择，淘汰抗病性差的植株，保留抗病性强的植株，从而提高育种效率，节约育种成本。

技术领域

本发明涉及植物种植技术领域，具体涉及一种通过核桃叶片气孔密度鉴别核桃抗病性的方法。

背景技术

植物体表的自然空口有气孔、皮孔、水孔等，绝大多数细菌和真菌，都可通过自然空口侵入。在叶的解刨结构中，叶表皮中有许多气孔器分散在表皮细胞之间。气孔器是由二个肾形的保卫细胞围合而成。两个保卫细胞之间的裂生胞间隙称为气孔，他们是叶片与外界环境之间气体交换的通道。气孔在表皮上的数目、位置和分布，随植物的种类各异，且与生态条件有关。大多数植物每平方毫米的下表皮平均有气孔100-300个。

植物的抗病性与叶片气孔的密度存在一定的相关性，如，黄瓜叶片上气孔密度低，对霜霉病菌抗性强，反之就弱。研究表明，抗霜霉病的葡萄品种的叶片气孔的密度显著少于抗病性差的品种。富士苹果、南瓜、紫花苜蓿等植物叶片气孔密度与抗病性呈显著负相关，气孔密度越高抗病性越弱。

核桃细菌性黑斑病等病害是中国核桃产区危害严重的病害，可以造成30％-50％落果，导致产量降低，影响经济效益。在核桃育种过程中，培育抗病性强的品种是核桃育种的重要目标之一。然而，常规育种是一个比较漫长的过程，在确定杂交亲本的情况下，培育出一个理想的品种，需要16-20年的时间，有时甚至会更长。因此，品种的早期鉴别尤为重要。虽然分子辅助育种技术的发展，为杂种早期选择提供了可能，但因其成本较高，技术不成熟，未能得到普遍应用。

品种的早期鉴别是影响育种进程和育种效率的重要因素。培育的杂种幼苗通过早期鉴别和选择，可以保留综合性状优良的单株，淘汰性状差的单株。这将提高育种效率，降低品种培育的成本。

实际生产中发现，不同品种对核桃细菌性黑斑病的抗性不同，如‘礼品2号’、‘辽宁7号’、‘寒丰’抗病性强，而‘辽宁1号’、‘辽宁6号’抗病性差。如何实现品种的早期鉴别呢？观察法是通常采用的早期选择的方法之一，但肉眼观察的局限性会制约判断的准确性。

发明内容

本发明通过提供一种通过核桃叶片气孔密度鉴别核桃抗病性的方法，以解决背景技术中的问题。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种通过核桃叶片气孔密度鉴别核桃抗病性的方法，包括以下步骤：

步骤1)采集不同品种核桃叶片；

步骤2)将所述不同品种核桃叶片下表皮制备成切片；

步骤3)将所述切片进行显微观察气孔个数；

步骤4)将所述气孔个数进行记录和分析，得到不同核桃品种的叶片气孔密度；

步骤5)对不同核桃品种的气孔密度数据进行相关性分析，获得所述不同核桃品种的气孔密度与抗病能力的相关性；

步骤6)根据所述不同核桃品种的气孔密度与抗病能力的相关性和所述不同核桃品种的叶片气孔密度判断不同核桃品种抗病性的强弱。

作为本发明进一步方案：所述步骤1)中的核桃叶片采集通过以下方法获得：在核桃生长季，当叶片发育完全时，采集核桃树东西南北四个方向中上部位，外围的叶片，每株树采集不同方向羽状复叶中间部位小叶5片；每次采集的时间相同；将采集到的叶片用清水洗净，并用纸巾吸干叶片表面的水分备用。

作为本发明进一步方案：步骤2)所述将采集的核桃叶片下表皮制备成切片，通过采用火棉胶法获得：用火棉胶随机涂抹下表皮的5个部位，待火棉胶干后，再用镊子取下火棉胶薄片，置于载玻片上，用盖玻片压平，待用。