[发明专利]基于时间分辨免疫荧光分析仪检测抗体配对的抗体筛选方法

说明书

本发明涉及一种基于时间分辨免疫荧光分析仪检测抗体配对的抗体筛选方法，具体包括以下步骤：S1：制备荧光标记物，使用制备的荧光标记物标记抗体；S2：将抗体包被至固相载体中，并进行封闭；S3：将待检抗原加入所述步骤S2的固相载体中，使抗原与抗体相结合，形成抗原抗体复合物；S4：向所述步骤S3的固相载体中加入所述步骤S1中已荧光标记的抗体，进行孵育后，放入时间分辨免疫荧光分析仪进行检测，筛选抗体。该基于时间分辨免疫荧光分析仪检测抗体配对的抗体筛选方法提高了抗体筛选配对成功率，减轻了工作量，具有高通量筛选抗体配对的优点，同时提高了与POCT免疫层析技术平台抗体配对符合率。

技术领域

本发明涉及单克隆抗体配对筛选技术领域，尤其涉及一种基于时间分辨免疫荧光分析仪检测抗体配对的抗体筛选方法。

背景技术

双抗体夹心法，属于非竞争结合测定，适用于检测分子中具有至少两个抗原决定簇的多价抗原，其基本工作原理是利用连接于固相载体上的抗体和标记物标记抗体分别与样品中被检测抗原分子上两个抗原决定簇结合，形成固相抗体-抗原-标记物抗体免疫复合物，由于反应系统中固相抗体和标记抗体的量相对于待测抗原的是过量的，因此免疫复合物的量与待测抗原的量成正比(在可检测范围内)。

荧光微球标记技术：羧基聚苯乙烯微球具有分散性好、比表面积大、吸附性强、凝集作用大，机械性能好和生物不可降解性，已经广泛应用于酶固定、色谱分离、药物传递和生物传感等诸多领域。羧基聚苯乙烯微球由于表面富含羧基，易与氨基结合，从而在生物医疗和诊断领域受到广泛关注，常用的羧基荧光微球的激发波长和发射波长分别是365nm和615nm。

时间分辨免疫荧光分析仪，可同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨，可有效地排除非特异荧光的干扰，极大地提高了分析灵敏度，时间分辨免疫荧光分析仪采用紫外LED作为激发光源，紫外LED的峰值波长为345nm，与羧基荧光微球的峰值激发波长接近，滤光片的透射光谱在345nm处的透过率为0.03％，在613nm处的透过率为82.9％。

目前抗体标记有以下几种，但都具有相应的技术缺陷。

1.抗体的酶标记：通过共价键经适当方法将酶联结在抗体上，制成酶标抗体，再借酶对底物的特异催化作用，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，这些有色产物可用肉眼、光学显微镜和电子显微镜观查，也可以用分光光度计测定。但酶标抗体的质量取决于抗体制备方法，易受游离的氨基和其它干扰性物质影响标记效率。

2.抗体的生物素化标记：亲和素与生物素都可与蛋白质(包括抗原、抗体、酶等)、荧光素等分子结合而不影响后者的生物活性，是理想的标记剂。一个抗体分子可偶联数十个生物素或亲和素分子，而亲和素或生物素分子又可与酶或荧光素结合，从而组成一个生物放大系统，显著提高检测的灵敏度。但当游离ε- 氨基(赖氨酸残基的氨基)存在于抗体的抗原结合位点时，或位于酶的催化位点时，生物素化会降低或损伤抗体蛋白的结合力或活性。此时，应试用其它交联方法。

3.抗体的荧光素标记：荧光抗体标记技术是将荧光素以化学方法与特异性抗体共价结合，形成荧光素-蛋白质结合物(即荧光标记抗体)，此结合物仍保留着抗体活性，同时具有荧光素的示踪作用。当它与相应的抗原特异结合后，借助于荧光显微镜观察呈现明亮的特异荧光。但FITC唯一的缺陷是易被光淬灭，因此复合物必须始终避光保存。

发明内容

本发明要解决的技术问题是，提供一种基于时间分辨免疫荧光分析仪检测抗体配对的抗体筛选方法，此方法可以提供一种标记物，用于高通量的快速筛选抗体配对，提高与POCT免疫层析技术平台抗体配对符合率。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：基于时间分辨免疫荧光分析仪检测抗体配对的抗体筛选方法，具体包括以下步骤：

S1：制备荧光标记物，使用制备的荧光标记物标记抗体；

S2：将抗体包被至固相载体中，并进行封闭；