[发明专利]一种阻断IL-8联合抗PD-1抗体治疗胃癌的动物模型构建及应用

说明书

本发明属于动物模型构建技术领域，具体涉及一种阻断IL‑8联合抗PD‑1抗体治疗胃癌的动物模型构建及应用。本发明将人PBMCs过继到免疫缺陷小鼠NCG体内，并皮下注射CXCR1/2敲除的人源性胃癌细胞（HGC‑27），并用胃癌患者来源间充质干细胞（GCMSCs）上清作用，在动物模型体内实现三大人源化，更加接近真实人体内环境，有利于研究人源性IL‑8在抗PD‑1免疫治疗中的作用。可应用在开发IL‑8信号通路阻断剂联合免疫检查点阻断（ICB）治疗的临床前评估产品中，起到改善肿瘤免疫微环境，提高胃癌治疗预后的作用。

技术领域

本发明属于动物模型构建技术领域，具体涉及一种阻断IL-8联合抗PD-1抗体治疗胃癌的动物模型构建及应用。

背景技术

胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其预后差，进展期胃癌的5年生存率仅为5％-20％。目前，进展期胃癌抗PD-1治疗临床疗效不理想，有效率不足30%，提高免疫治疗有效率是胃癌免疫治疗中亟待解决的问题。合理的动物模型是探索抗PD-1耐药机制的实验基础。目前已报道了一些免疫系统人源化小鼠（Hu-PBMCs）模型用于探究肿瘤抗PD-1治疗相关作用机制。由于在小鼠基因组中缺乏人白细胞介素-8（IL-8）同源物，在临床前模型中难以研究IL-8相关免疫治疗耐药的机制基础。间充质干细胞（GCMSCs）是胃癌微环境重要组成成份。GCMSCs 在通过旁分泌作用影响肿瘤免疫环境。目前，尚未有涉及肿瘤相关间充质干细胞及IL-8的报道，GCMSCs来源的IL-8对胃癌抗PD-1治疗的作用及机制尚不清楚。

发明内容

本发明旨在探究阻断IL-8联合抗PD-1治疗提高胃癌免疫治疗疗效的可行性。针对现有技术中存在的不足，在原有Hu-PBMCs模型基础上，兼顾肿瘤基质细胞的影响，构建了一种阻断IL-8联合抗PD-1抗体治疗胃癌的动物模型NCG^hPBMC小鼠胃癌异种移植模型，进而探究了胃癌间质来源IL-8对胃癌抗PD-1免疫治疗的影响。

为达到上述目的，本发明采取如下技术手段：

本发明提供了一种NCG^hPBMC小鼠异种移植模型的构建方法，具体包括如下步骤：

（1）从胃癌组织中分离出GCMSCs细胞进行传代培养得到GCMSC-CM；

（2）分离人PBMCs，并将过继到免疫缺陷小鼠体内，流式细胞术检测小鼠外周血中人CD45⁺ 细胞比例大于25%，得到NCG^hPBMC小鼠；

（3）第 0 天开始NCG^hPBMC小鼠皮下注射CXCR1/2敲除的人源性胃癌细胞HGC-27，第7天瘤周注射步骤（1）制备的GCMSC-CM；

（4）第 8 天开始，腹腔注射PD-1单抗，检测肿瘤生长状态，在第 21 天安乐死小鼠，构建得到NCG^hPBMC小鼠异种移植模型。

进一步地，步骤（1）中所述的传代培养为待GCMSCs细胞中长梭状细胞融合度到达80%以上后进行0.25%胰酶消化。

步骤（2）中所述的免疫缺陷小鼠为NCG小鼠。

步骤（3）中所述瘤周注射的注射量为200 µL。

步骤（4）中所述PD-1单抗的注射量为10 mg/kg。

本发明还提供了一种NCG^hPBMC小鼠胃癌异种移植模型，所述的小鼠胃癌异种移植模型为将人PBMCs过继到免疫缺陷小鼠NCG体内，并皮下注射CXCR1/2敲除的人源性胃癌细胞，与胃癌来源间充质干细胞GCMSCs上清作用后构建的小鼠胃癌异种移植模型。

本发明还提供了一种Hu-PBMCs动物模型在人源性IL-8在抗PD-1抗体药效和免疫相关评价中的应用。