[发明专利]麦角硫因合成基因在谷氨酸棒杆菌中重建麦角硫因代谢途径中的应用及其方法在审
| 申请号： | 202111674170.4 | 申请日： | 2021-12-31 |
| 公开（公告）号： | CN114262702A | 公开（公告）日： | 2022-04-01 |
| 发明（设计）人： | 邹祥;柏颖娜 | 申请（专利权）人： | 西南大学 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12N9/02;C12N15/53;C12N15/60;C12N15/77;C12N15/66;C12N1/21;C12P13/04;C12R1/15 |
| 代理公司： | 重庆航图知识产权代理事务所(普通合伙) 50247 | 代理人： | 王贵君 |
| 地址： | 400715*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 麦角 合成 基因 谷氨酸 杆菌 重建 代谢 途径 中的 应用 及其 方法 | ||
1.麦角硫因合成基因在谷氨酸棒杆菌中重建麦角硫因代谢途径中的应用，其特征在于：所述麦角硫因合成基因包括Egt1和Egt2，所述Egt1的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述Egt2的核酸序列如SEQ ID NO.4所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述麦角硫因合成基因为经过密码子优化适用于谷氨酸棒杆菌表达的序列，优化后所述Egt1的核酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述Egt2的核酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.适用于谷氨酸棒杆菌表达的粗糙脉孢菌麦角硫因合成基因，其特征在于：所述麦角硫因合成基因包括Egt1和Egt2，所述Egt1的核酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述Egt2的核酸序列如SEQ ID NO.2所示。
4.含有权利要求3所述适用于谷氨酸棒杆菌表达的粗糙脉孢菌麦角硫因合成基因的重组表达载体。
5.根据权利要求4所述的重组表达载体，其特征在于：所述含有麦角硫因合成基因的表达载体为含有Egt1和Egt2的pXMJ19重组载体。
6.根据权利要求5所述的重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体具体构建过程如下：将SEQ ID NO.1所示序列通过SalI和NotI连入pXMJ19载体，得到pXMJ19-egt1质粒；将SEQ ID NO.2所示序列通过SalI和NotI连入pXMJ19载体，得到pXMJ19-egt2质粒；将构建的pXMJ19-egt1用NheI及NotI进行双酶切，酶切反后回收目的片段作为载体，将构建好的pXMJ19-egt2作为模板，扩增含有tac启动子的egt2基因，然后与酶切后的pXMJ19-egt1连接，得到重组表达载体pXMJ19-egt1-tac-egt2。
7.含有权利要求3所述适用于谷氨酸棒杆菌表达的粗糙脉孢菌麦角硫因合成基因的谷氨酸棒杆菌工程菌。
8.利用权利要求3所述适用于谷氨酸棒杆菌表达的粗糙脉孢菌麦角硫因合成基因在谷氨酸棒杆菌中生产麦角硫因的方法，其特征在于：构建含有麦角硫因合成基因的表达载体，然后转入谷氨酸棒杆菌中，发酵生产麦角硫因。
9.根据权利要求8所述适用于谷氨酸棒杆菌表达的粗糙脉孢菌麦角硫因合成基因在谷氨酸棒杆菌中生产麦角硫因的方法，其特征在于：所述发酵培养的方法是将粗糙脉孢菌工程菌接种至种子培养基中，30℃培养12h，再按1％的接种量接种至发酵培养基中30℃，220rpm，发酵72h。
10.根据权利要求8所述适用于谷氨酸棒杆菌表达的粗糙脉孢菌麦角硫因合成基因在谷氨酸棒杆菌中生产麦角硫因的方法，其特征在于：所述种子培养基各组分浓度如下：25g/L葡萄糖、5g/L硫酸铵、30g/L玉米浆、1g/L磷酸氢二钾、0.5g/L七水硫酸镁、10g/L碳酸钙；所述发酵培养基的各组分浓度如下：100g/L葡萄糖、45g/L硫酸铵、10g/L玉米浆、1g/L磷酸氢二钾、0.5g/L七水硫酸镁、10g/L碳酸钙、0.9g/L半胱氨酸、0.9g/L甲硫氨酸。
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