[发明专利]工程化免疫细胞、纳米凝胶及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种纳米凝胶的制备方法，其特征是，包括如下步骤：

1)、配置连接剂溶液；

2)、向单抗溶液中加入步骤1)所述的连接剂溶液进行混合反应，反应时间为1～2小时，得到纳米凝胶；其中，所述单抗是PD-1单抗，所述连接剂是DTSSP，所述单抗和所述连接剂的摩尔比为1：25～1：200；

3)、向步骤2)得到的纳米凝胶中加入二苯并环辛炔-四聚乙二醇-N-羟基丁二酰亚胺DBCO-PEG4-NHS溶液，并在摇床上进行反应，得到DBCO-aPD1-NGs纳米凝胶；

或向步骤2)得到的纳米凝胶中加入二硬脂酰磷脂酰乙酰胺-聚乙二醇2000-N-羟基丁二酰亚胺DSPE-PEG2000-NHS溶液，并在摇床上进行反应，得到DSPE-aPD1-NGs纳米凝胶。

2.权利要求1所述的纳米凝胶的制备方法，其特征是，所述单抗还可以是CTLA-4单抗、TNFα单抗。

3.权利要求1或2所述的纳米凝胶的制备方法所制备的纳米凝胶。

4.一种工程化免疫细胞，其特征是，使权利要求1所述的DBCO-aPD1-NGs与叠氮化物标记的工程化免疫细胞通过点击化学反应相结合，使纳米凝胶锚点在工程化免疫细胞表面。

5.权利要求4所述的工程化免疫细胞，其特征是，所述工程化免疫细胞由以下方法制备而成：

1)、配置二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-叠氮基DSPE-PEG2000-N3溶液；

2)、向工程化免疫细胞重悬液加入至步骤1)所述的DSPE-PEG2000-N3溶液中进行混合反应，得到表面连有DSPE-PEG2000-N3的工程化免疫细胞；

3)、将表面连有DSPE-PEG2000-N3的工程化免疫细胞重悬于培养基中，同时向培养基中加入所述DBCO-aPD1-NGs进行孵育，待孵育结束后，收集表面结合有DBCO-aPD1-NGs的工程化免疫细胞。

6.一种工程化免疫细胞，其特征是，使权利要求1所述的DSPE-aPD1-NGs与工程化免疫细胞共孵育相结合，使纳米凝胶锚点在工程化免疫细胞表面。

7.权利要求6所述的工程化免疫细胞，其特征是，所述工程化免疫细胞由以下方法制备而成：

1)、工程化免疫细胞重悬在培养基中；

2)、向步骤1)的培养基中加入所述的DSPE-aPD1-NGs进行孵育，待孵育结束后，收集表面结合有DSPE-aPD1-NGs的工程化免疫细胞。

8.权利要求4～7中任一项所述的工程化免疫细胞，其特征是，所述工程化免疫细胞包括T细胞、NK细胞或巨噬细胞。

9.抑制剂，其特征是，包括权利要求4～8中任一项所述的工程化免疫细胞。

10.药物组合物，其特征是，包括权利要求4～8中任一项所述的工程化免疫细胞和和药学上可接受的辅料。

11.权利要求4～8中任一项所述的工程化免疫细胞、权利要求9所述的抑制剂在制备用于过继细胞疗法的药物中的应用，以抑制实体瘤的生长，所述过继细胞疗法使用T细胞受体T细胞或嵌合抗原受体T细胞。