[发明专利]一种人血浆肾素活性液相色谱质谱联用检测方法

权利要求书

1.一种人血浆肾素活性液相色谱质谱联用检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)配制缓冲体系，对样本进行孵育，所述缓冲体系中包含血管紧张素转化酶抑制剂；

2)向孵育后的样本中加入内标液和蛋白沉淀剂，对样本进行前处理；

3)取经过前处理后的上清液，采用液相色谱质谱联用仪进行检测，采用内标法，结合色谱系统和质谱系统，将进样样品中的物质分离并对血管紧张素I进行定量及定性检测；

4)计算单位时间内单位体积的样本中的血管紧张素I的生成速率。

2.根据权利要求1所述的人血浆肾素活性液相色谱质谱联用检测方法，其特征在于，步骤1)中所述样本包括校正样本、质控样本和病人样本，所述孵育是指将孵化液和样本按照2:3的比例混合后，置于96孔板中进行孵化。

3.根据权利要求2所述的人血浆肾素活性液相色谱质谱联用检测方法，其特征在于，所述孵化为在37℃条件下水浴孵化1.5-5小时。

4.根据权利要求1所述的人血浆肾素活性液相色谱质谱联用检测方法，其特征在于，步骤2)中，所述内标液为血管紧张素I内标溶液，所述血管紧张素I内标溶液的浓度为10-200ng/mL；所述蛋白沉淀剂包括有机溶剂、金属盐或强酸。

5.根据权利要求4中所述的人血浆肾素活性液相色谱质谱联用检测方法，其特征在于，所述蛋白沉淀剂为含有甲酸的乙腈或含有甲酸的甲醇，所述甲酸的含量为0.1％-10％。

6.根据权利要求1所述的人血浆肾素活性液相色谱质谱联用检测方法，其特征在于，步骤1)中，所述样本的体积为50-500μL。

7.根据权利要求1所述的人血浆肾素活性液相色谱质谱联用检测方法，其特征在于，步骤3)中，所述液相色谱质谱联用仪的色谱条件为：

色谱柱为反相柱，进样体积为0.5-50μL；柱温为25-60℃；流速为0.3-2mL/min；洗脱方式为梯度洗脱；流动相A为甲酸水溶液，流动相B为含有甲酸的甲醇液或含有甲酸的乙腈液。

8.根据权利要求7所述的人血浆肾素活性液相色谱质谱联用检测方法，其特征在于，所述流动相A和流动相B中的甲酸比例为0.01％-1％。

9.根据权利要求7所述的人血浆肾素活性液相色谱质谱联用检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的程序为：

流动相A+流动相B＝100％；0-0.5min，流动相B体积百分比维持在0％-40％；0.5-2.5min，流动相B体积百分比由0％-40％增至40％-100％；2.50-2.51min，流动相B体积百分比由40％-100％递减至40％-0％；2.51-3.00min，流动相B保持体积百分比为0％-40％。

10.根据权利要求1所述的人血浆肾素活性液相色谱质谱联用检测方法，其特征在于，步骤3)中，所述液相色谱质谱联用仪的质谱参数为：

离子源为电喷雾离子源；离子模式设置为正离子模式；监测模式为多反应监测；驻留时间为0.108s；锥孔电压为10～50V；毛细管电压为0.3～0.6V；脱溶剂气温度为450～650℃；脱溶剂气流速为1000L/Hr；锥孔气流速为150L/Hr；定量离子对为Ang I：433.1±0.5→647.5±0.5，Ang I-IS：435.1±0.5→653.5±0.5。