[发明专利]双粒径聚苯乙烯微球偶联肌红蛋白测定试剂盒及制备方法

权利要求书

1.一种双粒径聚苯乙烯微球偶联肌红蛋白测定试剂盒，其特征在于包含：R1试剂、R2试剂以及校准品，其中，R1试剂成分中含有第一缓冲液、促凝剂、稳定剂、防腐剂；R2试剂成分中含有第二缓冲液、氯化钠、偶联抗肌红蛋白抗体的聚苯乙烯微球、防腐剂；校准品含有：肌红蛋白、第三缓冲液、稳定剂、防腐剂，所述聚苯乙烯微球为带有羧基臂的聚苯乙烯微球。

2.根据权利要求1所述的双粒径聚苯乙烯微球偶联肌红蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述的第一缓冲液、第二缓冲液和第三缓冲液为以下之一或其组合：三羟甲基氨基甲烷缓冲液、磷酸盐缓冲液。

3.根据权利要求1所述的双粒径聚苯乙烯微球偶联肌红蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述稳定剂为以下之一或其任意组合：离子稳定剂、悬浮稳定剂；所述防腐剂为以下之一或其任意组合：叠氮钠、硫柳汞、苯酚、乙基汞硫代硫酸钠，所述的促凝剂为以下或其任意组合：葡聚糖、聚乙烯吡络烷酮。

4.根据权利要求3所述的双粒径聚苯乙烯微球偶联肌红蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述离子稳定剂为以下之一或其组合：氯化钠、氯化钾，所述悬浮稳定剂为聚乙二醇; 所述的促凝剂为聚乙烯吡络烷酮。

5.权利要求1所述的一种双粒径聚苯乙烯微球偶联肌红蛋白试剂盒的制备方法，其特征在于包含以下步骤：

R1试剂的制备，R1试剂成分中含有第一缓冲液、促凝剂、稳定剂、防腐剂；

R2试剂的制备，R2试剂成分中含有第二缓冲液、氯化钠、偶联抗肌红蛋白抗体的聚苯乙烯微球、防腐剂；

一个聚苯乙烯微球的活化步骤：用缓冲液将聚苯乙烯微球稀释后，加入N-羟基琥珀酰亚胺溶液，混合均匀、搅拌，在搅拌中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液，继续搅拌反应30～60min之后离心、超声洗涤溶解到缓冲液中，即得到聚苯乙烯微球溶液；

抗体的偶联：向所述聚苯乙烯微球溶液中加入抗肌红蛋白抗体溶液，震荡反应60～120min；

微球的封闭：向所述震荡反应过程中的混合液加入牛血清白蛋白；

洗涤、溶解：将所述震荡反应结束后的混合物经过离心、超声洗涤后，溶解到含有防腐剂缓冲液中，即得肌红蛋白测定试剂盒。

6.根据权利要求5所述的一种双粒径聚苯乙烯微球偶联肌红蛋白试剂盒的制备方法，其特征在于，所述聚苯乙烯微球的活化步骤中的缓冲液为2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液，其中，所述缓冲液的浓度为25～50mM，pH为5.5～6.5。

7.根据权利要求5所述的一种双粒径聚苯乙烯微球偶联肌红蛋白试剂盒的制备方法，其特征在于使用以下两个物质活化聚苯乙烯微球，所述N-羟基琥珀酰亚胺溶液的浓度为50～100 mg/mL，所述的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液的浓度为5～10mg/mL。

8.根据权利要求5所述的一种双粒径聚苯乙烯微球偶联肌红蛋白试剂盒的制备方法，其特征在于，所述聚苯乙烯微球的活化步骤中的聚苯乙烯粒子的粒径为60～400nm。