[实用新型]外周血NK细胞的分离装置

说明书

本实用新型属于生物医学技术领域，具体涉及外周血NK细胞的分离装置，包括微流控芯片，微流控芯片开设有首尾串联的六个腔室，位于首段的腔室连接有进样槽，位于尾端的腔室连接有富集槽。本实用新型提供的外周血NK细胞的分离装置，对预先分离的PBMC进行分步分离非目标细胞，从而实现对靶细胞的纯化，技术流程属于细胞的阴性富集法，因此分离全程不接触靶细胞，不会对靶细胞产生刺激，所以最大程度减少对靶细胞功能活性的影响。无需使用磁场分离，简化了流程，一次性微流控芯片装置，人工操作少，制造成本低，单次最多可分离25mL的全血样本，分离通量大。

技术领域

本实用新型属于生物医学技术领域，具体涉及外周血NK细胞的分离装置。

背景技术

NK细胞(NK)是一群大颗粒淋巴细胞，它们不需要抗原激活，以MHC非限制性的方式杀伤肿瘤细胞。成熟的NK细胞离开骨髓进入外周免疫器官，主要分布在脾脏、肝脏和外周血中。NK细胞是固有免疫的第一道防线，在免疫监视中具有重要作用，它又是获得性免疫调节的关键细胞，并参与造血的调节等过程。

目前，NK细胞的分离纯化方式主要分为以下几种：Percoll分离法、淘洗分离法、磁珠分选法和流式分选法，其中以磁珠分选法最为常用。磁珠分选法是利用偶联抗CD56或DX5抗体的磁珠，从而把CD56或DX5的NK细胞分离出来。但是存在如下不足：由于抗体结合了NK细胞，对NK细胞造成刺激，可能影响功能实验的准确性；另一方面可采用阴性分选法，在上述方法中磁珠及抗体不接触NK细胞，减少对NK细胞功能造成影响，但是磁珠和细胞的非特异性结合不可避免且操作复杂，从而磁珠分选法的分离纯度受限。分离纯度也受限于抗体的活性和特异性，对抗体的生产工艺、运输、保存、使用条件有较高要求；分离效果与磁铁的制造工艺和磁场稳定性密切相关，高质量磁铁需要进口且价格较高，且每个磁铁每次仅能分离1个样本，以上多个因素限制了实验的高通量开展。

实用新型内容

针对上述现有技术的不足，本实用新型提供了外周血NK细胞的分离装置，目的是为了解决现有磁珠分选法中，阳性分选法由于抗体结合了NK细胞，对NK细胞造成刺激，可能影响功能实验的准确性；另一方面可采用阴性分选法，在上述方法中磁珠及抗体不接触NK细胞，减少对NK细胞功能造成影响，但是磁珠和细胞的非特异性结合不可避免且操作复杂，从而磁珠分选法的分离纯度受限的技术问题。

本实用新型提供的外周血NK细胞的分离装置，具体技术方案如下：

外周血NK细胞的分离装置，包括微流控芯片，所述微流控芯片开设有首尾串联的六个腔室，位于首段的所述腔室连接有进样槽，位于尾端的所述腔室连接有富集槽，

六个所述腔室一一对应包被有捕获干细胞的抗体、捕获粒细胞、单核细胞和淋巴细胞的抗体、捕获T细胞的抗体、捕获T细胞和树突状细胞的抗体、捕获B细胞的抗体、捕获树突状细胞的抗体。其中六个腔室将PBMC细胞溶液中的T细胞、B细胞、单核细胞、树突状细胞、粒细胞、干细胞捕获去除，仅留有NK细胞在富集槽中富集。上述六个抗体顺序不固定，可以任一顺序进行排布。

在某些实施方式中，每个所述腔室呈菱形，每个所述腔室均设有多个阵列分布的微柱，相邻两个所述微柱的间隙大于NK细胞的直径。菱形设置保证了在液体向前流动过程中与腔室有最大的接触面积，从而能够最大化利用抗体。

进一步，所述微柱的直径为60μm，所述微柱的高度为50μm，相邻两个所述微柱的间隙为60μm。

在某些实施方式中，每个所述腔室的两端分别开设有进样口和出样口，所述进样口通过液槽与前端所述腔室的出样口连通。待处理血液通过液槽流至下一个腔室。

在某些实施方式中，六个所述腔室呈S型分布在所述微流控芯片上。如此，保证微流控芯片具有合适的尺寸，避免微流控芯片过长。