[实用新型]一种用于检测黄龙病亚洲菌株的试纸条、试剂盒

说明书

本实用新型公开了一种用于检测黄龙病亚洲菌株的试纸条、试剂盒，涉及病菌检测领域，该试纸条底板，底板的一端为加样端，底板上自加样端依次搭接有样品垫、结合垫、NC膜和吸水纸，NC膜上设置有检测线和质控线，结合垫上包被有荧光微球标记的第一抗体，所述第一抗体为McAb2单克隆抗体，所述包被有荧光微球标记的第一抗体的粒径为230‑240nm；所述NC膜上包覆有放大膜，所述放大膜为凸面结构透明膜。本实用新型能够直接在田间使用，且操作难度较低，成本较低。

技术领域

本实用新型涉及病菌检测领域，具体涉及一种用于检测黄龙病亚洲菌株的试纸条、试剂盒。

背景技术

黄龙病的病原体是革兰氏阴性细菌，目前检测到的包括来自中国的三种亚洲假丝酵母(CLas)，来自非洲的非洲假丝酵母(CLaf)和来自美国的假丝酵母美国(CLam)。

柑橘在各个生长时期都有可能感染黄龙病，染病后经过一段长短不一的潜伏期后才表现症状，目前研究表面黄龙病菌主要通过柑橘木虱传播：柑橘木虱通过吸吮柑橘汁，其中某些细菌细胞被定殖在韧皮部细胞，植株感染黄龙病菌后引起韧皮部组织坏死和筛管堵塞，使得淀粉代谢异常，运输受阻，叶片积累大量淀粉导致叶脉会出现一定程度的肿大，叶面不平整，叶片失去光泽。

最近的发现表明CLas黄龙病菌首先破坏了柑橘的根系，从柑橘木虱的取食点移向根系，然后在根系繁殖并向叶转移，黄龙病细菌由于韧皮部细胞中的胼胝质沉积而导致韧皮部组织受阻，阻碍了淀粉和碳水化合物从叶片向果实和根部的移位，通过限制韧皮部细胞中的运输，CLas缩短了树的寿命和产量，最终导致树的死亡。

柑橘黄龙病的症状从叶片开始显现，然后逐步向根部蔓延，叶片先出现黄化、变脆、变硬，与正常叶片相比偏小等症状，之后出现果实的大小减小、颜色的变色和过早的果实的掉落，最终阻止了果实的生长。

目前，我国尚无特效药可根治黄龙病，也未选育出抗病品种与砧木，当前最有效的防治措施是我国长期实践总结出来的“三板斧”：及时挖除病树，大范围防控柑橘木虱和使用无病苗木，因此，及时诊断病株是防治的关键所在。

目前诊断包括以下方式：

1、田间诊断

通过观察树体、叶片和果实等的外观症状即时做出诊断，但柑橘黄龙病叶片黄化的症状容易与其他病害引起的黄化所混淆，根据黄化的叶片判断，需要经验较为丰富的专业人员，对检测人员要求较高，且主观性较强，准确度较低。

2、血清学方法诊断

血清学检测如酶联免疫吸附测定(ELISA)和直接组织印迹免疫测定(DTBIA)是基于抗原的快速检测方法，效率较高且成本较低，但是，由于HLB病原体至今未能成功在体外培养针对CLas细胞的抗体，因此，CLas病原体难以用血清学方法进行检测。

3、指示作物鉴定法

在室温条件下，以蓬柑作为指标植物接种HLB，与未接种的对照植株相比，新芽明显具有更弱的褪绿性，并且叶片更小，接种后8 至12周后叶片出现典型的斑点和萎黄症状。在温室条件下，HLB的当前嫁接传递和在当地柑橘产业中具有重要商业意义的特定柑橘种质上的表达，但是，在进一步的HLB疾病传播中，指示作物没有将其他症状如果实较小等表达出来，部分被感染的植物长时间保持无症状，因此，该鉴定方法的准确度较低。

4、病原显微镜观察法

2009年采用透射电子显微镜(TEM)和光学显微镜检测受感染的巴伦西亚甜橙树的茎，叶柄，树皮，根和叶中的黄龙病细菌，使用 TEM对疾病感染的组织进行分析后发现，该病原细菌具有革兰氏阴性类型的细胞壁，并且完全位于被感染的柑橘树的筛管内，但是，该方法操作难度较大，成本较高。

5、分子生物学诊断