[实用新型]一种新型冠状病毒2019-nCoV快速抗原检测现场确诊试剂盒

说明书

本实用新型涉及一种不仅使用安全性好，而且能够现场进行快速检测，同时生产成本低，同时生产效率高的一种新型冠状病毒2019‑nCoV快速抗原检测现场确诊试剂盒，包括卡壳和试纸条，所述卡壳内设有试纸条，所述卡壳的上端面设有观察窗口和样品窗口，所述观察窗口正对试纸条中的反应垫，所述样品窗口正对试纸条中的样品垫，所述样品垫的上端面设有呈点阵分布的圆形凹槽，所述圆形凹槽的深度为样品垫厚度的三分之一到二分之一之间。优点：一是试剂盒能够避免一些潜在的次生污染发生，其使用安全性更好；二是试剂盒，其由于结构简单、布局合理，这样不仅能够降低试剂盒的生产成本，而且能够提高试剂盒的生产效率。

技术领域

本实用新型涉及一种不仅使用安全性好，而且能够现场进行快速检测，同时生产成本低，同时生产效率高的一种新型冠状病毒2019-nCoV快速抗原检测现场确诊试剂盒，属于检测试纸条制造领域。

背景技术

CN 112326966 A、名称“一种新型冠状病毒抗原的快速检测试剂盒”，包括盒体和放于盒体内的试剂条，所述试剂条包括底板以及沿底板长度方向依次首尾搭接的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；所述结合垫上包被有胶体金标记的抗核衣壳蛋白单克隆抗体和抗棘突糖蛋白单克隆抗体；所述硝酸纤维素膜上分别包被有抗核衣壳蛋白单克隆抗体构成的核衣壳蛋白检测线N线，包被有抗棘突糖蛋白单克隆抗体构成的刺突糖蛋白检测线S线，以及包被有羊抗鼠IgG抗体构成的质控线C线。所述结合垫上包被的胶体金标记的抗核衣壳蛋白单克隆抗体和抗棘突糖蛋白单克隆抗体的制备方法如下：制备金标抗体，将制备好的金标抗体喷于结合垫上，所述结合垫采用SB-08玻璃纤维膜，在温度为37℃的干燥环境中干燥5h，使金标抗体固化在结合垫上，密封保存。所述金标抗体的制备方法如下：取1mL胶体金溶液，所述胶体金溶液最大可见光吸光值所对应的波长范围为520nm～530nm，并加入10μL、使用浓度范围为0 .02M～0 .5M的碳酸钾，混匀2min；混匀后的溶液内加入终浓度为5- 20μg/mL的抗核衣壳蛋白单克隆抗体和终浓度为5～20μg/mL的抗棘突糖蛋白单克隆抗体作为标记抗体，混匀10min；再加入0 .1mL BSA作为封闭剂，所述BSA的使用质量分数浓度范围为1％～10％，混匀30min；加入BSA混匀后的溶液，在4℃下、12500rpm的转速下离心10min，小心弃去上清，再用40μL、pH为8 .0的Tris-HCL缓冲液重悬沉淀，所述Tris-HCL缓冲液的使用浓度范围为0 .01M～0 .1M，在重悬液中加入蔗糖作为保护剂，所述蔗糖的质量分数终浓度为5％～30％，充分混匀，制出金标抗体。还包括划膜包被液，用划膜包被液将抗核衣壳蛋白单克隆抗体、抗棘突糖蛋白单克隆抗体稀释至1～2mg/mL，然后将稀释后的抗核衣壳蛋白单克隆抗体、抗棘突糖蛋白单克隆抗体依次划在硝酸纤维素膜上邻近结合垫的一端作为检测线，将羊抗鼠IgG抗体划在硝酸纤维素膜的另一端上作为质控线，并将划线后的硝酸纤维素膜置于37℃的干燥环境中干燥48h，得到带有检测线和质控线的硝酸纤维素膜。所述划膜包被液包括PBS缓冲盐、异丙醇、Triton X-100和海藻糖；所述PBS缓冲盐使用终浓度范围为0 .001M～0 .05M、pH＝8 .2的PBS缓冲盐；所述异丙醇使用体积分数终浓度范围为1％～5％的异丙醇；所述Triton X-100使用体积分数终浓度范围为0.0001％～0 .001％的Triton X-100；所述海藻糖使用终浓度范围为0.1％～1％的海藻糖。所述样品垫经样品垫处理液浸泡30min，弃去多余液体，置于温度为37℃的干燥环境中干燥12h，取出，备用。所述样品垫处理液包含PBS缓冲液、酪蛋白和Tween-20；所述PBS缓冲液使用浓度范围为0 .01M～0 .1M、pH＝7 .4的PBS缓冲盐；所述酪蛋白使用质量分数浓度为0 .1％～1％的酪蛋白；所述Tween-20使用体积分数浓度为0 .1％ ～1％的Tween-20；所述样品垫采用SB-08玻璃纤维膜。所述制备方法包括 以下步骤：步骤一，样品垫的制备：样品垫采用SB-08玻璃纤维膜，配置样品垫处理液，所述样品垫处理液包含PBS缓冲液、酪蛋白和Tween-20；所述PBS缓冲液使用浓度范围为0 .01M～0 .1M、pH＝7 .4的PBS缓冲盐；所述酪蛋白使用质量分数浓度为0 .1％～1％的酪蛋白；所述Tween- 20使用体积分数浓度为0 .1％～1％的Tween-20；将样品垫浸泡在样品垫处理液中30min，并弃去多余液体，将浸泡后的样品垫置于温度为37℃的干燥环境中干燥12h，取出，用。步骤二，结合垫的制备：结合垫采用SB-08玻璃纤维膜；首先，制备金标抗体，取1mL胶体金溶液，所述胶体金溶液最大可见光吸光值所对应的波长范围为520nm～530nm，并加入10μL、使用浓度范围为0 .02M～0 .5M的碳酸钾，混匀2min；混匀后的溶液内加入终浓度为5-20μg/mL的抗核衣壳蛋白单克隆抗体和终浓度为5～20μg/mL的抗棘突糖蛋白单克隆抗体作为标记抗体，混匀10min；再加入0 .1mL BSA作为封闭剂，所述BSA的使用质量分数浓度范围为1％～10％，混匀30min；加入BSA混匀后的溶液，在4℃下、12500rpm的转速下离心10min，小心弃去上清，再用40μL、pH为8 .0的Tris-HCL缓冲液重悬沉淀，所述Tris-HCL缓冲液的使用浓度范围为0 .01M～0 .1M，在重悬液中加入蔗糖作为保护剂，所述蔗糖的质量分数终浓度为5％～30％，充分混匀，制出金标抗体；然后，将制备好的金标抗体喷于结合垫上，在温度为37℃的干燥环境中干燥5h，使金标抗体固化在结合垫上，密封保存；步骤三，点膜：配置划膜包被液；所述划膜包被液包括PBS缓冲盐、异丙醇、Triton X-100和海藻糖；所述PBS缓冲盐使用终浓度范围为0 .001M～0 .05M、pH＝8 .2的PBS缓冲盐；所述异丙醇使用体积分数终浓度范围为1％～5％的异丙醇；所述Triton X-100使用体积分数终浓度范围为0 .0001％～0 .001％的Triton X-100；所述海藻糖使用终浓度范围为0 .1％～1％的海藻糖；用划膜包被液将抗核衣壳蛋白单克隆抗体、抗棘突糖蛋白单克隆抗体稀释至1～2mg/mL，然后将稀释后的抗核衣壳蛋白单克隆抗体、抗棘突糖蛋白单克隆抗体依次划在硝酸纤 维素膜上邻近结合垫的一端作为检测线，将羊抗鼠IgG抗体划在硝酸纤维素膜的另一端上作为质控线，并将划线后的硝酸纤维素膜置于37℃的干燥环境中干燥48h，得到带有检测线和质控线的硝酸纤维素膜。步骤四，试剂卡的组装：将经步骤一至三中处理过的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次粘接于底板上，并切割成3.00mm宽度的试剂条，装入盒体模板中制成试剂盒。所述试剂盒的盒体上设置有加样孔和观察窗；所述加样孔位于样品垫的上方，所述观察窗位于检测线和质控线的上方。所述应用步骤如下：采用样本稀释液稀释待测样本后，将稀释后的待测样本通过加样孔滴加于试剂条的样品垫上，在15～20分钟内，通过观察窗观察试剂条上检测线和质控线的结果。其不足之处在于：一是该种新型冠状病毒抗原的快速检测试剂盒的结构，其检测试纸条和盒体安装效率较低，从而降低了其生产效率；二是该种新型冠状病毒抗原的快速检测试剂盒中的底壳结构复杂，从而提高了试剂盒整体的生产成本；三是该种新型冠状病毒抗原的快速检测试剂盒在加入样液时样液会出现溅射问题，使得其具有一定的使用安全隐患。