[发明专利]包含突变的LysE的微生物和使用其生产L-氨基酸的方法

说明书

提供了包含突变的LysE的微生物和使用该微生物生产L‑氨基酸的方法。与野生型LysE相比，突变的LysE具有改善输出和/或生产L‑氨基酸的能力的作用。

技术领域

相关申请的交叉引用

本申请要求于2020年2月13日向韩国知识产权局提交的KR10-2020-0017559的权益，其全部公开内容通过引用并入本文。

提供了包含突变的LysE的微生物和使用该微生物生产L-氨基酸的方法。与野生型LysE相比，突变的LysE可以增强输出和/或生产L-氨基酸的能力。

背景技术

属于棒状杆菌属(Corynebacterium)的微生物是革兰氏阳性的，并且已广泛用于生产L-氨基酸。L-氨基酸，尤其是L-赖氨酸，在动物饲料工业以及人类医学和化妆品工业中获得应用。对于工业应用，L-氨基酸大部分是通过使用棒状杆菌属菌株发酵而产生的。

已经进行了许多尝试来改进使用棒状杆菌属菌株生产L-氨基酸的方法。其中之一是重组DNA技术的研究，通过该技术可操纵特定基因以敲低或减弱表达从而生产L-氨基酸。另外，已经进行了这样的研究，即扩增并分析了参与L-氨基酸生物合成的每种基因对L-氨基酸生产的影响，从而修饰生产L-氨基酸的棒状杆菌属菌株。另外，已经尝试引入源自其他细菌的外来基因。

然而，仍然需要开发用于提高有用物质如L-氨基酸的生产潜力的技术。

发明内容

技术问题

一种实施方式提供了突变的赖氨酸输出物。例如，突变的赖氨酸输出物可以是从SEQ ID NO:1的氨基酸序列的N末端开始的第65位氨基酸天冬酰胺(Asn，N)被其他氨基酸取代的多肽。该多肽可以具有L-氨基酸(例如L-赖氨酸、L-精氨酸、其组合等)的输出物的活性。

另一种实施方式提供了编码该多肽(突变的赖氨酸输出物)的多核苷酸。

另一种实施方式提供了包含该多核苷酸的重组载体。

另一种实施方式提供了包含该多肽，编码所述多肽的多核苷酸或包含所述多核苷酸的重组载体的重组微生物。与非突变的微生物相比，重组微生物可以具有输出和/或生产L-氨基酸的能力，或者具有增加的输出和/或生产L-氨基酸的能力。

另一种实施方式提供了生产L-氨基酸的方法，其包括培养重组微生物或生产L-氨基酸的微生物。

技术方案

根据本文提供的实施方式，基于对棒状杆菌属(Corynebacterium spp.)微生物中参与赖氨酸生产的基因的扩增如何影响其赖氨酸生产潜力的研究，提出了一种用于氨基酸生产的菌株修饰技术。通常，增加赖氨酸生产潜力的策略包括提高赖氨酸的生产收率或增加每单位时间赖氨酸的输出量(生产率)。作为其一部分，本文提出通过改进L-赖氨酸输出物蛋白来增加赖氨酸的收率和/或生产率，所述L-赖氨酸输出物蛋白是具有释放通过生物合成而生产的赖氨酸功能的膜蛋白。本申请的实施方式提供了涉及通过改进L-赖氨酸输出物蛋白和/或编码该蛋白的lysE基因而开发出具有增强的L-氨基酸(例如L-赖氨酸、L-精氨酸、其组合等)输出能力的菌株的技术。

一种实施方式提供了突变的赖氨酸输出物。例如，突变的赖氨酸输出物可以是从SEQ ID NO:1的氨基酸序列的N末端开始的第65位氨基酸天冬酰胺(Asn，N)被其他氨基酸取代的多肽。该多肽可以具有L-氨基酸(例如L-赖氨酸、L-精氨酸、其组合等)的输出物的活性。

另一种实施方式提供了编码该多肽(突变的赖氨酸输出物)的多核苷酸。

另一种实施方式提供了包含该多核苷酸的重组载体。该重组载体可以用作表达载体。