[发明专利]在多肽生产中具有提高的生产力的丝状真菌细胞的突变体

权利要求书

1.一种亲本丝状真菌细胞的分离的突变体，该突变体包含：

(a)编码目的多肽的多核苷酸；

(b)编码Rho-GTP酶RacA蛋白的racA基因，其中该racA基因在该亲本丝状真菌细胞中经修饰以产生该突变体，使得该突变体在该Rho-GTP酶RacA蛋白的产生方面部分或完全缺陷；以及

(c)编码GTP酶Ras2蛋白的ras2基因，其中该GTP酶Ras2蛋白在该亲本丝状真菌细胞中经修饰以产生GTP酶Ras2变体，该变体在与SEQ ID NO:11的位置16相对应的位置处包含取代；

其中经修饰的racA基因和该Ras2变体的组合协同地增加了该突变体在该目的多肽产生中的生产力。

2.如权利要求1所述的突变体，其中该Rho-GTP酶RacA选自由以下组成的组：

(i)Rho-GTP酶RacA蛋白，其包含与SEQ ID NO:2具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；

(ii)Rho-GTP酶RacA蛋白，其由包含与SEQ ID NO:1具有至少70％序列同一性的核苷酸序列的多核苷酸编码；以及

(iii)Rho-GTP酶RacA蛋白，其由包含如下核苷酸序列的多核苷酸编码，该核苷酸序列在高严格条件下与SEQ ID NO:1的全长互补序列杂交。

3.如权利要求1所述的突变体，其中该GTP酶Ras2选自由以下组成的组：

(i)GTP酶Ras2蛋白，其包含与SEQ ID NO:11具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；

(ii)GTP酶Ras2蛋白，其由包含与SEQ ID NO:10具有至少70％序列同一性的核苷酸序列的多核苷酸编码；以及

(iii)GTP酶Ras2蛋白，其由包含如下核苷酸序列的多核苷酸编码，该核苷酸序列在高严格条件下与SEQ ID NO:10的全长互补序列杂交。

4.如权利要求1-3中任一项所述的突变体，其中该GTP酶Ras2变体在位置16处有氨基酸残基被缬氨酸(Val)取代。

5.如权利要求4所述的突变体，其中该GTP酶Ras2变体在SEQ ID NO:11的位置16处或对应于SEQ ID NO:11的位置16处包含取代Gly16Val。

6.如权利要求1-5中任一项所述的突变体，其中该GTP酶Ras2变体与SEQ ID NO:11的多肽具有至少70％，例如至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性。

7.如权利要求1-6中任一项所述的突变体，其中该目的多肽对于该亲本丝状真菌细胞或其突变体是天然的。

8.如权利要求1-6中任一项所述的突变体，其中该目的多肽对于该亲本丝状真菌细胞或其突变体是异源的。

9.如权利要求1-8中任一项所述的突变体，其中该目的多肽是抗体、抗原、抗微生物肽、酶、生长因子、激素、免疫调节剂、神经递质、受体、报告蛋白、结构蛋白或转录因子。

10.如权利要求1-8中任一项所述的突变体，其中该目的多肽是纤维素酶。

11.如权利要求10所述的突变体，其中该纤维素酶是内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶或β-葡糖苷酶。

12.如权利要求1-8中任一项所述的突变体，其中该目的多肽是半纤维素酶。

13.如权利要求12所述的突变体，其中该半纤维素酶是木聚糖酶、乙酰木聚糖酯酶、阿魏酸酯酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、木糖苷酶、或葡糖醛酸糖苷酶。