[发明专利]用于病毒清除的疏水相互作用色谱

说明书

本申请提供了一种用于表征和/或确定疏水相互作用色谱(HIC)的病毒清除能力的方法，其包括HIC的病毒清除的多变量分析的实验设计。所述方法通过运行D‑最优实验设计提供了对使用HIC进行的所述病毒清除的机制的理解，所述D‑最优实验设计包括对多种因子的评价，如pH、缓冲液浓度、柱加载浓度、柱流速或所述HIC柱的疏水强度。

技术领域

本发明总体上涉及表征疏水相互作用色谱的病毒清除能力的方法，包括多变量分析的实验设计。

背景技术

生物制品可能被不想要的病毒污染，导致传播病毒疾病的风险。全球卫生当局要求对制造生物制剂或生物技术产品的病毒清除进行评价，因为病毒载量可以在哺乳动物细胞培养物生长期间倍增。有效的病毒清除研究是过程验证的基本部分，这对于确保药物安全性至关重要。病毒污染会影响原料、细胞培养过程、生物反应器和下游纯化过程。

病毒验证研究旨在提供所选操作条件将有效灭活和/或清除病毒的证据。病毒清除研究的实验设计包括制造过程的表征，以确保其去除病毒的能力，并提高对处理条件的理解。在评价病毒污染物的清除时，选择最坏情况条件进行评价是合理的。

病毒灭活或去除的过程包括pH处理、热处理、过滤或色谱。色谱步骤可以用于纯化具有为病毒清除提供病毒减少的潜力的生物制品，如蛋白A、阴离子交换色谱或疏水相互作用色谱(HIC)。当色谱步骤用于捕获单克隆抗体时，病毒可能与抗体和/或色谱树脂相互作用。对于使用HIC进行的抗体纯化，对与HIC的流通模式相关的病毒清除的理解有限，例如，当抗体出现在流通中时，不需要的组分的选择性结合。

将认识到，需要有效表征制造过程的病毒清除能力以确保药物安全的方法，包括建立解释机制并证明选择最坏情况条件的合理性的回顾性病毒清除数据库，如提高对HIC的病毒清除能力的理解。

发明内容

本公开提供了确定动态因子对HIC的病毒清除能力的影响的方法，包括HIC的病毒清除的多变量分析的实验设计。本公开还提供了对病毒清除机制的理解和对病毒清除的最坏情况处理条件的理解以增强药物安全性。另外，本公开提供了建立解释机制并证明选择最坏情况条件的合理性的回顾性病毒清除HIC数据库的方法。为了利用HIC清除病毒，本公开提供与指示逆转录病毒的清除相关的HIC的表征以获得对该过程的理解。

本公开还提供了一种从包含一种或多种包括病毒颗粒的杂质的样本中纯化抗体的方法，其包含以下步骤：(a)提供包含宿主细胞中产生的抗体的样本、(b)将样本的pH调节到约4.2至约8.0的范围、(c)将样本加载到疏水相互作用色谱(HIC)柱，其中样本的浓度为约40g/L至约200g/L和(d)收集HIC处理的样本。

在一些示范性实施例中，柠檬酸盐缓冲液用于调节该方法的样本的pH，其中柠檬酸盐缓冲液的浓度为约10mM至约200mM。在一些方面，该方法的HIC柱的树脂是苯基或capto苯基树脂。在一些方面，该方法的HIC柱的疏水强度在弱疏水强度到强疏水强度的范围内，其中该弱疏水强度使用苯基树脂或其等同物实现，其中该强疏水强度使用capto苯基树脂或其等同物实现。

在一些方面，该方法的抗体是单克隆抗体或双特异性抗体，其中该抗体具有IgG1同种型或IgG4同种型。在一些方面，通过该方法的HIC柱的流速具有约100cm/小时至约300cm/小时的线速度。

在一些方面，本申请的方法进一步包含测量病毒基因组拷贝的存在和/或测量病毒颗粒的存在。在一些方面，本申请的方法进一步包含测量病毒基因组拷贝和病毒颗粒两者的存在。

本公开至少部分地提供了一种从包含一种或多种包括病毒颗粒的杂质的样本中纯化抗体的方法，其包含以下步骤：(a)提供包含宿主细胞中产生的抗体的样本、(b)将样本的pH调节到约4.2至约8.0的范围、(c)将样本加载到疏水相互作用色谱(HIC)柱，其中样本的浓度为约40g/L至约200g/L，(d)收集HIC处理的样本，和(e)测量步骤(d)的HIC处理的样本中病毒基因组拷贝和/或感染性病毒颗粒的存在。