[发明专利]通过去除叶酸受体蛋白来重新定义家畜奶以减少妊娠和孤独症患者的叶酸受体自身免疫障碍

权利要求书

1.一种生产不含叶酸受体(FRF)的奶的方法，包括：使用选自由以下各项组成的组的方法从奶制品中去除叶酸受体：尺寸排阻色谱、糖基磷脂酰肌醇(GPI)捕获柱亲和色谱、叶酸受体结合抗体亲和柱色谱、使用附着于所述FR结合抗体的蛋白酶的所述叶酸受体的特异性消化、用以去除所述FR的所述奶制品的分馏，或使用特异性结合奶中所述叶酸受体的配体的亲和色谱。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述尺寸排阻色谱包括：使用至少38kDa的膜从奶中过滤所述叶酸受体。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述叶酸受体结合抗体亲和柱色谱包括：产生针对所述叶酸受体的抗体；将所述抗体固定至固体基质中的所述叶酸受体；以及将奶溶液与所述固体基质和针对所述叶酸受体的抗体混合，以从所述奶溶液中选择性去除所述叶酸受体抗原。

4.根据权利要求3所述的方法，其中使用附着于所述FR结合抗体的蛋白酶的所述叶酸受体的所述特异性消化包括：将蛋白酶附接至叶酸受体抗体；以及选择性消化奶溶液中的所述叶酸受体。

5.根据权利要求4所述的方法，其中使用特异性结合奶中所述叶酸受体的配体的所述亲和色谱包括：在奶溶液中使用叶酸以高亲和力结合所述叶酸受体。

6.一种用于降低孤独症比率的不含叶酸受体的奶的系统，包括：在哺乳动物中产生靶向所述叶酸受体的shRNA，进行所述shRNA的核转染，鉴定所述阳性单克隆，以及进行核移植到产生缺乏叶酸受体抗原的奶的哺乳动物中。

7.一种在牛成纤维细胞中敲低叶酸受体的方法，包括：鉴定shRNA文库中的shRNA，并且在传感器试验中验证所述shRNA，以发现有效力且特异性地沉默所述叶酸受体的shRNA；证实成纤维细胞中的所述shRNA敲低；克隆含有shRNA或shRNA串联体的载体；以及将所述载体插入到成纤维细胞中。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述载体是乳房特异性启动子-shRNA或乳房特异性启动子-shRNA-shRNA-shRNA。

9.根据权利要求7所述的方法，其中所述shRNA载体特异性地插入到乳房特异性基因中。

10.根据权利要求8所述的方法，其中所述传感器试验是基于功能性荧光的报告试验，包括：多个LPE-shRNA、含有shRNA-靶位点的gBlock、基于GFP的报告载体、ERC鸡细胞系、Phoenix-E细胞系、多个选自以下组的辅助质粒：VSV-G、Gag-Pol辅助质粒(Eco或Ampho辅助质粒)、多个转染试剂、多个细胞培养试剂(DMEM、FBS、Trypsin)、多个细胞培养板、多个荧光激活细胞分选仪(FACS)管。

11.根据权利要求9所述的方法，其中所述shRNA文库选自图7所示的所述shRNA。

12.根据权利要求10所述的方法，进一步包括通过核移植产生转基因哺乳动物；以及使用乳房特异性启动子和基因编辑来敲入有效力且特异性地沉默所述叶酸受体的shRNA。

13.根据权利要求11所述的方法，其中所述乳房特异性启动子在牛成纤维细胞中使用。

14.根据权利要求12所述的方法，其中所述核移植使用CRISPR基因编辑以在乳房特异性基因内敲入。

15.根据权利要求13所述的方法，进一步包括沉默所述乳腺中的叶酸受体表达以减少奶中的所述叶酸受体抗原。

16.一种奶制品，包括：用于制备选自由以下各项组成的组的产品的不含叶酸奶制品：散装奶；用于制作奶酪的散装奶，无论所述奶在制作奶酪之前是否经过巴氏消毒、灭菌或其它减少微生物种群的处理；奶粉、奶固体；酪蛋白、酪蛋白酸盐和酪蛋白水解产物；巴氏消毒、灭菌、防腐的奶，包括微滤奶、UHT奶；低脂奶；改良或增强型奶；冰淇淋或其它冷冻的基于乳制甜食；发酵奶制品，诸如酸奶或凝乳；奶酪，包括全脂、部分脱脂以及脱脂的加工奶酪；奶乳清；通过添加奶制品(诸如汤)富集的食品；已除去潜在过敏原分子的奶；甜食，诸如巧克力；碳酸化奶制品，包括添加磷酸盐和/或柠檬酸盐的那些；婴儿配方，其可以包含全脂、部分脱脂或脱脂奶以及许多额外的补充剂；液体或粉状饮料混合物，以及酪乳和酪乳粉。