[发明专利]HMO产生

权利要求书

1.一种能够产生一种或多种人乳寡糖(HMO)的遗传修饰细胞，其中所述细胞包含编码SEQ ID NO:1的蛋白质或其功能性同源物的重组核酸，所述功能性同源物的氨基酸序列与SEQ ID NO:1具有至少80％同一性、优选至少85％同一性、更优选至少90％同一性。

2.根据权利要求1所述的遗传修饰细胞，其中所述寡糖选自2’-岩藻糖基乳糖(2’-FL)、3-岩藻糖基乳糖(3-FL)、二岩藻糖基乳糖(DFL)、3’-唾液酸基乳糖(3’-SL)、6’-唾液酸基乳糖(6’-SL)、乳-N-三糖-2(LNT-2)、乳-N-新四糖(LNnT)、乳-N-四糖(LNT)、乳-N-岩藻五糖I(LNFP-I)、乳-N-岩藻五糖II(LNFP-II)、乳-N-岩藻五糖III(LNFP-III)、乳-N-岩藻五糖IV(LNFP-IV)和乳-N-岩藻五糖V(LNFP-V)和/或对乳-N-新六糖(pLNnH)。

3.根据前述权利要求中任一项所述的遗传修饰细胞，其中所述遗传修饰细胞为大肠杆菌(Escherichia coli)。

4.根据前述权利要求中任一项所述的遗传修饰细胞，其中所述细胞还包含重组DNA序列，所述重组DNA序列包含用于调控所述重组核酸表达的调控元件。

5.根据权利要求4所述的遗传修饰细胞，其中用于调控所述重组核酸表达的所述调控元件是启动子元件，比如lac启动子Plac或glp启动子PglpF。

6.一种核酸构建体，其包含编码SEQ ID NO:1的蛋白质或其功能性同源物的核酸序列，所述功能性同源物与SEQ ID NO:1具有大于80％的序列同一性，其中编码SEQ ID NO:1的蛋白质的核酸序列与SEQ ID NO:2具有至少70％的序列同一性。

7.根据权利要求6所述的核酸构建体，其中所述构建体还包含核酸序列，所述核酸序列包含调控元件。

8.根据权利要求7所述的核酸构建体，其中所述调控元件调控与SEQ ID NO:2具有至少70％序列同一性的所述核酸序列的表达。

9.根据权利要求7-8中任一项所述的核酸构建体，其中用于调控重组核酸表达的调控元件是表达元件，比如lac启动子Plac或glp启动子PglpF。

10.一种用于产生一种或多种寡糖的方法，所述方法包括以下步骤：

(i)提供能够产生HMO的遗传修饰细胞，其中所述细胞包含编码SEQ ID NO:1的蛋白质或其功能性同源物的重组核酸，所述功能性同源物具有与SEQ ID NO:1至少80％同一性、优选至少85％同一性、更优选至少90％同一性的氨基酸序列；

(ii)在合适的细胞培养基中培养根据(i)所述的细胞，以表达所述重组核酸；

(iii)收获步骤(ii)中产生的一种或多种HMO。

11.根据权利要求1-5中任一项所述的遗传修饰细胞或根据权利要求6-9中任一项所述的核酸构建体用于产生一种或多种寡糖、优选一种或多种人乳寡糖的用途。

12.根据权利要求1-5中任一项所述的遗传修饰细胞或根据权利要求6-9中任一项所述的核酸构建体用于产生选自2’-FL、3-FL、DLF、LNT、LNT-II、LNnT、pLNH-II和pLNnH的HMO的用途。

13.根据权利要求1-5中任一项所述的遗传修饰细胞或根据权利要求6-9中任一项所述的核酸构建体用于产生选自LNT、LNT-II、LNnT、pLNH-II和pLNnH的HMO的用途。