[发明专利]在中枢神经系统炎症性疾病患者中用于检测MOG-IGG的基于细胞的检测方法

说明书

本发明涉及一种用于检测MOG‑IgG的方法，其中，包括：(a)将编码MOG的核酸克隆到荧光蛋白表达载体的步骤；(b)将克隆MOG的所述表达载体转染到细胞的步骤；(c)通过在含有选择试剂的培养基中培养所述经转染的细胞来选择稳定转染细胞株的步骤；(d)将所述选择的细胞株与预期含有MOG‑IgG的样品一起孵育的步骤；(e)在完成孵育的样品中添加荧光偶联的第二抗体以形成MOG‑IgG和第二抗体偶联物的步骤；以及(f)从所述MOG‑IgG和第二抗体偶联物检测或分析荧光的步骤、以及提供用于预测或诊断MOG‑IgG相关的中枢神经系统炎症性疾病的信息的方法、用于诊断MOG‑IgG相关的中枢神经系统炎症性疾病的组合物、以及MOG‑IgG相关的中枢神经系统炎症性疾病的诊断方法。在本发明中，当使用荧光偶联的IgG(H+L)作为特异性结合MOG‑IgG的第二抗体时，CBA‑IF和CBA‑FACS结果之间存在很强的正相关性，并确认到与传统的IgG1(Oxford)CBA‑IF相比，也显示出高约98％的一致率，特别是，本发明的方法，通过制备表达MOG的稳定细胞株，存在不需要重复转染，并且，与第二抗体IgM不发生交叉反应，特异性高，能获得更清晰的荧光信号的优点。

技术领域

本发明涉及一种用于从样品中检测MOG-IgG的方法，包括：(a)将编码MOG(myelinoligodendrocyte glycoprotein)的核酸克隆到荧光蛋白表达载体的步骤；(b)将克隆MOG的所述表达载体转染(transfection)到细胞的步骤；(c)通过在含有选择试剂(selectiondrug)的培养基中培养所述经转染的细胞来选择稳定转染细胞株的步骤；(d)将所述选择的细胞株与预期含有MOG-IgG的样品一起孵育的步骤；(e)在完成孵育的样品中添加荧光偶联的第二抗体以形成MOG-IgG和第二抗体偶联物的步骤；以及(f)从所述MOG-IgG和第二抗体偶联物检测或分析荧光的步骤、提供用于预测或诊断MOG-IgG相关的中枢神经系统炎症性疾病的信息的方法、用于诊断MOG-IgG相关的中枢神经系统炎症性疾病的组合物、以及MOG-IgG相关的中枢神经系统炎症性疾病的诊断方法。

背景技术

自身抗体的血清状态(Serostatus)是在包括自身免疫性疾病在内的多种神经系统疾病中重要诊断标准。使用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyteglycoprotein，MOG)作为底物开发的基于细胞的检测(cell-based assay，CBA)，确认了具有各种脱髓鞘表型的MOG-IgG阳性患者。儿童和成人的急性播散性脑脊髓炎(acutedisseminated encephalomyelitis，ADEM)、癫痫发作、脑炎(Encephalitis)、水通道蛋白4(aquaporin 4，AQP4)-IgG阴性视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)、视神经炎(opticneuritis，ON)、脊髓炎、脑干脑炎中存在MOG-IgG。另一方面，由于多发性硬化症(multiplesclerosis，MS)患者中不存在MOG-IgG，因此，被认为区分多发性硬化症和非MS中枢神经系统(CNS)脱髓鞘疾病。此外，MS及与MOG-IgG相关疾病患者之间存在临床、放射学、病理学和预后差异。根据最近的研究，尽管进行了免疫治疗，但MOG-IgG的持续阳性与临床复发相关，而转为血清阴性并不会导致临床复发。此外，血清学观点和其他实验方法表明MOG-IgG可能致病。尽管如此，MOG-IgG相关疾病的谱系仍未完全确定。因此，通过准确地定义临床表型、病程和预后，开发敏感且高度特异性的检测方法来鉴定特异性自身抗体对于描绘MOG-IgG相关疾病的全谱非常重要。

发明内容

本发明的一目的在于，构建表达MOG的稳定转染细胞株，将其与从预计含有MOG-IgG的中枢神经系统(CNS)炎症性疾病的患者中分离出的样品反应，然后，添加特异性结合MOG-IgG的荧光偶联的第二抗体并检测或分析荧光，从而，从血液或血清等样品检测MOG-IgG，进而，揭示与MOG-IgG相关疾病的全谱。