[发明专利]募集DNA聚合酶用于模板化编辑

权利要求书

1.第一复合物，包括：

(a)第一序列特异性DNA结合蛋白，其能够结合靶核酸上的第一位点；和

(b)第一DNA依赖性DNA聚合酶。

2.权利要求1所述的第一复合物，还包含第一DNA编码的修复模板。

3.权利要求1或权利要求2所述的第一复合物，进一步包括第一DNA核酸内切酶，其中所述DNA核酸内切酶能够引入单链切口或双链断裂，或者能够结合靶核酸上的第一位点的第一序列特异性DNA结合蛋白还包含能够引入单链切口或双链断裂的核酸内切酶活性。

4.第一复合物，包括：

(a)第一序列特异性DNA结合蛋白，其能够结合靶核酸上的第一位点并且包含能够引入单链切口或双链断裂的核酸内切酶活性；

(b)第一DNA依赖性DNA聚合酶；和

(c)第一DNA编码的修复模板。

5.第一复合物，包括：

(a)第一序列特异性DNA结合蛋白，其能够结合靶核酸上的第一位点；

(b)第一DNA依赖性DNA聚合酶；

(c)第一DNA核酸内切酶；和

(d)第一DNA编码的修复模板。

6.权利要求1至5中任一项所述的第一复合物，其中所述第一序列特异性DNA结合蛋白来自多核苷酸引导的核酸内切酶、CRISPR-Cas效应蛋白、蛋白质引导的核酸内切酶(例如，锌指核酸酶)、转录激活因子样效应核酸酶(TALEN)和/或Argonaute蛋白。

7.权利要求3至6中任一项所述的第一复合物，其中所述第一DNA核酸内切酶是核酸内切酶(例如，Fok1)、多核苷酸引导的核酸内切酶、CRISPR-Cas效应蛋白、蛋白质引导的核酸内切酶(例如，锌指核酸酶)和/或转录激活因子样效应核酸酶(TALEN)。

8.权利要求3至7中任一项所述的第一复合物，其中所述第一DNA核酸内切酶是核酸酶或切口酶。

9.权利要求1至8中任一项所述的第一复合物，还包含引导核酸(例如，crRNA、crDNA)。

10.权利要求1、2或6至9中任一项所述的第一复合物，其中所述第一序列特异性DNA结合蛋白包含核酸内切酶或切口酶活性。

11.权利要求10所述的第一复合物，其中所述第一序列特异性DNA结合蛋白的核酸内切酶或切口酶活性来自多核苷酸引导的核酸内切酶、CRISPR-Cas效应蛋白、蛋白质引导的核酸内切酶(例如，锌指核酸酶)和/或转录激活因子样效应核酸酶(TALEN)。

12.权利要求1至11中任一项所述的第一复合物，其中所述第一序列特异性DNA结合蛋白任选地通过接头(在其N-末端或C-末端)融合至所述第一DNA依赖性DNA聚合酶。

13.权利要求1至12中任一项所述的第一复合物，其中所述第一DNA依赖性DNA聚合酶表现出高保真度和/或高持续合成能力。

14.权利要求1至12中任一项所述的第一复合物，其中所述第一DNA依赖性DNA聚合酶表现出高分布谱。

15.权利要求1至14中任一项所述的第一复合物，其中所述第一DNA依赖性DNA聚合酶包含3’-5’核酸外切酶活性、5’-3’核酸外切酶活性和/或5’-3’RNA依赖性DNA聚合酶活性。

16.权利要求15所述的第一复合物，其中第一DNA依赖性DNA聚合酶被修饰以去除3’-5’核酸外切酶活性、5’-3’核酸外切酶活性和5’-3’RNA依赖性DNA聚合酶活性中的一个或多个。