[发明专利]等电聚焦样品基质

说明书

本公开文本提供了icIEF样品基质，所述icIEF样品基质使得能够对处于其实际缀合状态下的PEG化蛋白质进行icIEF分析。本公开文本的样品基质能够包括甘氨酸，其使得能够分离共迁移的PEG化蛋白质电荷变体。所述样品基质还能够包括牛磺酸，其通过消除基质导致的基线干扰来进一步改进icIEF测定。因此，本公开文本的包括甘氨酸和牛磺酸的组合的样品基质使得能够对PEG化蛋白质的酸性种类和碱性种类与主峰进行icIEF分离，允许对离散的PEG化蛋白质种类进行鉴定/分离、表征和定量。通过使用本公开文本的样品基质经由icIEF来表征PEG化蛋白质，实现了可重复性、线性、准确性、样品稳定性和方法稳健性。

技术领域

本公开文本提供了增加PEG化蛋白质和肽的成像毛细管等电聚焦分析的分辨率的组合物和方法。

背景技术

PEG化是聚乙二醇(PEG)链与蛋白质或其他分子缀合的过程(Veronese和Mero(2008)BioDrugs 22:315-329)。PEG化已经被用作增强治疗性蛋白质的药代动力学特性(Holm等人(2015)PloS One 10(7):e0133584；Jevsevar等人(2010)Biotechnol.J.5:113-128；Harris和Chess(2003)Nat.Rev.Drug Discov.2:214-221)以及降低免疫原性和毒性(Nucci等人(1991)Advanced Drug Delivery Reviews 6:133-151；Veronese和Pasut(2005)Drug Discov.Today 10:1451-1458)的策略，增强的药代动力学特性以及降低的免疫原性和毒性为治疗相关蛋白质的有吸引力的属性。

PEG-蛋白质缀合可以通过化学反应或酶促反应(Basle等人(2010)ChemistryBiology 17:213-227；O'Hare等人(2007)Current Opinion in Structural Biology 17:488-494)，以及通过半合成方法如表达蛋白连接(Muir(2003)Annual Review ofBiochemistry72:249-289)形成。可替代地，已经将非天然氨基酸作为化学处理物掺入重组蛋白中用于缀合聚乙二醇(Liu和Schultz(2010)Annual Review of Biochemistry 79:413-444)。

成像毛细管等电聚焦(icIEF)是当前用于确定蛋白质等电点(pI)以及电荷种类相对定量的行业标准(Sosic等人(2008)Electrophoresis 29:4368-4376；Cousteils等人(2019)Chromatography Today,2月26日)。然而，PEG化蛋白质的icIEF分离是有难度的。在PEG化蛋白质的icIEF分离中观察到相对较宽且扭曲的峰形。PEG化蛋白质的电荷变体在等电聚焦期间合并成一个宽峰，很可能是由于蛋白质被包围的聚乙二醇链掩蔽以及流体力学体积增加(Molineux(2002)Cancer Treat Rev.28:13-16)。改变例如载体两性电解质含量、甲基纤维素浓度、蛋白质浓度、聚焦时间以及添加其他添加剂不能产生合理的峰形(Li等人(2007)Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 43:963-972)。

因此，需要允许区分PEG化蛋白质的电荷变体的新的icIEF方法。

发明内容

本公开文本提供了一种成像毛细管等电聚焦(icIEF)样品基质，所述icIEF样品基质包含甘氨酸和/或牛磺酸。在一些方面，甘氨酸的浓度在约1mM与约200mM之间。