[发明专利]由天然或合成DNA产生的基于痘病毒的载体及其用途

权利要求书

1.一种产生痘病毒载体或重组痘病毒载体的方法，包括：

将一个或多个DNA片段转染入宿主细胞，其中所述一个或多个DNA片段包含想要的痘病毒的完整基因组DNA序列，使得所述痘病毒在宿主细胞中重构。

2.根据权利要求1所述的方法，其中将两个或更多个DNA片段共转染入宿主细胞，每个DNA片段包含痘病毒基因组的部分序列，使得所述两个或更多个DNA片段通过同源重组组装，且在所述宿主细胞中重构时包含所述痘病毒基因组的全长序列。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，进一步包括在转染所述一个或多个DNA片段之前，期间，或之后用辅助病毒感染所述宿主细胞以启动所述一个或多个DNA片段的转录。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述辅助病毒是禽痘病毒(FPV)，羊纤维瘤病毒，痘苗病毒，或牛痘病毒。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述一个或多个DNA片段在转染之前被环化，或以环状形式转染入所述宿主细胞。

6.根据权利要求5所述的方法，其中将所述一个或多个DNA片段克隆至质粒或细菌人工染色体(BAC)载体。

7.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述一个或多个DNA片段在共转染之前被线性化，或以线性化形式转染入所述宿主细胞。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述一个或多个DNA片段是天然衍生的，化学合成的，或天然衍生的和化学合成的DNA片段的组合。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述痘病毒基因组序列包含被修饰的痘苗安卡拉(MVA)登录号#U94848或#AY603355的序列。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中两个相邻DNA片段具有重叠序列以有助于同源重组。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述重叠序列的长度为约100bp至约5000bp。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述一个或多个DNA片段还包含反向末端重复(ITR)区。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述一个或多个DNA片段还包含痘病毒末端发夹环(HL)序列，痘病毒基因组解析(CR)序列，或两者，其中所述HL或所述CR序列作为单链或双链DNA序列以正义或反义方向添加至DNA片段的一端或两端。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述一个或多个DNA片段进一步包含一个或多个HL序列和一个或多个CR序列。

15.根据权利要求14所述的方法，其中每个HL序列在所述HL序列的两端的侧翼为两个CR序列。

16.根据权利要求13-15中任一项所述的方法，其中仅所述一个或多个DNA片段的子集包含所述HL或CR序列。

17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述一个或多个DNA片段进一步包含编码一个或多个抗原，亚单位，或其片段的一个或多个DNA序列，或其他异源DNA序列。

18.根据权利要求17所述的方法，其中两个或更多个DNA片段包含相同抗原，亚单位或其片段的DNA序列或相同异源DNA序列。

19.根据权利要求17所述的方法，其中两个或更多个DNA片段包含不同抗原，亚单位，或其片段的DNA序列或其他异源DNA序列。