[发明专利]用于植入碱基编辑细胞的组合物和方法

权利要求书

1.一种在患有血红蛋白病的受试者中植入核碱基编辑的造血干细胞或其祖细胞的方法，所述方法包括：

(a)使造血干细胞或其祖细胞在体外与向导RNA和包含多核苷酸可编程DNA结合结构域和脱氨酶结构域的碱基编辑器或编码所述碱基编辑器的多核苷酸接触，其中所述向导RNA靶向所述多核苷酸可编程DNA结合结构域以诱导靶血红蛋白(HBB)基因或HBG1/2的启动子区域中的核碱基变化，从而获得核碱基编辑的造血干细胞或其祖细胞；并且其中所述核碱基编辑的造血干细胞或其祖细胞在从供体收集后48小时内与所述gRNA和所述碱基编辑器接触；和

(b)向受试者施用有效量的所述核碱基编辑的造血干细胞或其祖细胞，以在施用后获得所述核碱基编辑的造血干细胞或其祖细胞在所述受试者组织中的植入。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述核碱基编辑的造血干细胞或其祖细胞包括从收集自供体的多形核血细胞(PBMC)富集的CD34⁺细胞。

3.一种在患有血红蛋白病的受试者中植入核碱基编辑的造血干细胞或其祖细胞的方法，所述方法包括：

(a)使造血干细胞或其祖细胞在体外与向导RNA和包含多核苷酸可编程DNA结合结构域和脱氨酶结构域的碱基编辑器或编码所述碱基编辑器的多核苷酸接触，其中所述向导RNA靶向所述多核苷酸可编程DNA结合结构域以诱导靶血红蛋白(HBB)基因或HBG1/2的启动子区域中的核碱基变化，从而获得核碱基编辑的造血干细胞或其祖细胞；和

(b)向受试者施用有效量的所述核碱基编辑的造血干细胞或其祖细胞，以在施用后获得所述核碱基编辑的造血干细胞或其祖细胞在所述受试者组织中的植入。

4.一种治疗受试者的血红蛋白病的方法，所述方法包括：

(a)使造血干细胞或其祖细胞在体外与向导RNA和包含多核苷酸可编程DNA结合结构域和脱氨酶结构域的碱基编辑器或编码所述碱基编辑器的多核苷酸接触，其中所述向导RNA靶向所述多核苷酸可编程DNA结合结构域以诱导靶血红蛋白(HBB)基因或HBG1/2的启动子区域中靶血红蛋白(HBB)基因中的核碱基变化，从而获得核碱基编辑的造血干细胞或其祖细胞；和

(b)向受试者施用有效量的所述核碱基编辑的造血干细胞或其祖细胞，以在施用后获得所述核碱基编辑的造血干细胞或其祖细胞在所述受试者组织中的植入。

5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述核碱基变化是A到G核碱基变化。

6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述脱氨酶结构域是腺苷脱氨酶结构域并与序列MSEVEFSHEYWMRHALTLAKRARDEREVPVGAVLVLNNRVIGEGWNRAIGLHDPTAHAEIMALRQGGLVMQNYRLIDATLYVTFEPCVMCAGAMIHSRIGRVVFGVRNAKTGAAGSLMDVLHYPGMNHRVEITEGILADECAALLCYFFRMPRQVFNAQKKAQSSTD(SEQ ID NO:3)共享至少85％的序列同一性，并且其中所述腺苷脱氨酶结构域能够催化腺嘌呤或腺苷的水解脱氨。

7.如权利要求6所述的方法，其中所述腺苷脱氨酶结构域包含以下改变中的一个或多个：Y123H、Q154S和Q154R。

8.如权利要求6或权利要求7所述的方法，其中所述腺苷脱氨酶结构域包含以下改变中的一个或多个：Y147T、Y147R、Q154S、Y123H和Q154R。

9.如权利要求6至8中任一项所述的方法，其中所述腺苷脱氨酶结构域包含选自由以下组成的组的改变的组合：

Y147R、Q154R和Y123H；

Y147R、Q154R和I76Y；

Y147R、Q154R和T166R；

Y147T和Q154R；Y147T和Q154S；以及

Y123H、Y147R、Q154R和I76Y。