[发明专利]用于靶肽产生的融合多肽

权利要求书

1.融合多肽，其在从N端至C端的方向上包含以下或由以下组成：

(i)纯化结构域，

(ii)自体蛋白酶结构域，

(iii)靶肽结构域，

(iv)任选地：信号序列，和

(v)任选地：接头序列，

其中所述自体蛋白酶结构域(ii)包含以下或由以下组成：根据SEQ ID No.：117的氨基酸序列或与SEQ ID No.：117具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列，以及

其中所述纯化结构域(i)与糖基质结合并且包含以下或由以下组成：根据SEQ ID No.：1、SEQ ID No.：2、SEQ ID No.：3、SEQ ID No.：4、SEQ ID No.：5、SEQ ID No.：6、SEQ IDNo.：7、SEQ ID No.：8或SEQ ID No.：9的至少一个氨基酸共有基序序列。

2.根据权利要求1所述的融合多肽，其中所述纯化结构域(i)包含选自以下的至少一个氨基酸序列或由选自以下的至少一个氨基酸序列组成：根据SEQ ID No.：10至SEQ ID No.：116的序列，优选SEQ ID No.：10至SEQ ID No.：13的序列，以及与所述序列中任一个具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的序列。

3.根据权利要求1或2所述的融合多肽，其中所述自体蛋白酶结构域(ii)包含选自以下的氨基酸序列或由选自以下的氨基酸序列组成：根据SEQ ID No.：118、SEQ ID No.：119或SEQ ID No.：120的序列和与所述序列中任一个具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的序列。

4.根据前述权利要求中任一项所述的融合多肽，其包含信号序列(iv)，其中所述信号序列(iv)是包涵体促进序列或分泌序列，优选革兰氏阴性细菌的IV型或II型分泌的分泌序列。

5.根据前述权利要求中任一项所述的融合多肽，其包含接头序列(V)，其中所述接头序列包含N端α螺旋和/或无规卷曲结构的C端序列。

6.重组核酸分子，其编码根据前述权利要求中任一项所述的融合多肽。

7.经遗传修饰的细胞，其包含根据权利要求6所述的重组核酸分子，其中所述细胞能够表达根据权利要求1至5中任一项所述的融合多肽。

8.根据权利要求7所述的经遗传修饰的细胞，其中所述细胞选自：大肠杆菌(Escherichia coli)、需钠弧菌(Vibrio natrigens)、酿酒酵母(Saccheromycescerevisiae)、黑曲霉(Aspergillus niger)、绿藻、微藻、HEK T293和中国仓鼠卵巢细胞(CHO)。

9.制备靶肽的方法，其包括以下步骤：

(a)提供根据权利要求7或8所述的经遗传修饰的细胞，

(b)在适合根据权利要求1至5中任一项所述的融合多肽表达的条件下培养所述细胞，

(c)获得所述融合多肽以及任选地，将获得的融合多肽解折叠并将所述融合多肽定向重折叠，

(d)使在步骤(c)中获得的所述融合多肽与糖基质接触，

(e)通过激活所述融合多肽的所述自体蛋白酶结构域来切割所述融合多肽，从而获得靶肽，

(f)收集包含所述靶肽的混合物。

10.根据权利要求9所述的方法，其中步骤(d)中的所述糖基质由选自以下的物质组成或包含选自以下的物质：淀粉、木质素糖聚合物、具有葡萄糖的α-1，4-和α-1，6糖苷键的共聚物或其他糖及其混合物，以及所述糖基质优选作为填充底物或作为由直链淀粉和支链淀粉组成的淀粉粒存在于填充柱中。