[发明专利]由心肌细胞表达的微RNA控制的基因载体

权利要求书

1.一种载体，其包含多核苷酸，所述多核苷酸包含编码一种或多种转基因的多核苷酸序列和微RNA的微RNA结合位点，其中所述微RNA结合位点可操作地连接到编码所述一种或多种转基因的所述多核苷酸序列，并且其中与心脏成纤维细胞相比，所述微RNA在心肌细胞或心肌细胞祖细胞中表达水平较高。

2.根据权利要求1所述的载体，其中与心脏成纤维细胞相比，所述微RNA结合位点促进心肌细胞或心肌细胞祖细胞中所述一种或多种转基因的表达的特异性抑制。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的载体，其中与所述微RNA在心肌细胞中的表达水平和/或所述微RNA在用心肌细胞重编程因子处理超过约7天的心脏成纤维细胞中的表达水平相比，所述微RNA在心脏成纤维细胞中表达水平较低和/或在用所述心肌细胞重编程因子处理约7天或更短时间的心脏成纤维细胞中表达水平较低。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的载体，其中所述微RNA是miR-208。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的载体，其中所述微RNA是miR-1。

6.根据权利要求1至3中任一项所述的载体，其中所述微RNA是miR-133。

7.根据权利要求4所述的载体，其中所述微RNA是miR-208a。

8.根据权利要求4所述的载体，其中所述微RNA是miR-208b。

9.根据权利要求8所述的载体，其中所述微RNA是miR-208b-3p。

10.根据权利要求9所述的载体，其中所述微RNA结合位点与ACAAACCTTTTGTTCGTCTTAT(SEQ ID NO：135)共享70％的同一性，并且在包含序列CGTCTTA的下划线的种子区域中没有错配。

11.根据权利要求9所述的载体，其中所述微RNA结合位点是AAAATATATGTAATCGTCTTAA(SEQ ID NO：136)。

12.根据权利要求9所述的载体，其中所述微RNA结合位点是ACAAACCTTTTGTTCGTCTTAT(SEQ ID NO：135)。

13.根据权利要求9所述的载体，其中所述微RNA结合位点是TGAAACCTTTTGTTCGTCTTAT(SEQ ID NO：137)。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的载体，其中所述多核苷酸包含至少两个用于所述微RNA的微RNA结合位点。

15.根据权利要求14所述的载体，其中所述多核苷酸包含至少四个用于所述微RNA的微RNA结合位点。

16.根据权利要求14或权利要求15所述的载体，其中所述多核苷酸包含至多六个用于所述微RNA的微RNA结合位点。

17.根据权利要求16所述的载体，其中所述多核苷酸包含四个用于所述微RNA的微RNA结合位点。

18.根据权利要求1至17中任一项所述的载体，其中所述一种或多种转基因包含一种或多种心肌细胞重编程因子。

19.根据权利要求18所述的载体，其中所述一种或多种心肌细胞重编程因子包含MYOCD、ASCL1、GATA4、MEF2C、TBX5、miR-133和MESP1中的两种或更多种。