[发明专利]ATP依赖性DNA连接酶

权利要求书

1.一种分离的ATP依赖性DNA连接酶或其酶活性片段，其中，所述DNA连接酶包含SEQ IDNo.1的氨基酸序列或包含与SEQ ID No.1具有至少70％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，并且其中所述DNA连接酶能够在跨越连接点的互补脱氧核糖核酸分子的存在下将3’-羟基-脱氧核糖核酸分子连接到5’磷酰基-核糖核酸分子的5’-端。

2.根据权利要求1所述的分离的ATP依赖性DNA连接酶或其酶促活性片段，其中，所述DNA连接酶包含与SEQ ID No.1具有至少75％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。

3.根据权利要求1所述的分离的ATP依赖性DNA连接酶或其酶促活性片段，其中，所述DNA连接酶具有选自以下各项的氨基酸序列：

(a)SEQ ID No.1或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列，

(b)SEQ ID No.7或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列，

(c)SEQ ID No.10或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列，或

(d)SEQ ID No.16或与其至少80％同一性的氨基酸序列，并且

其中所述DNA连接酶能够在跨越连接点的互补脱氧核糖核酸分子存在下将3’-羟基-脱氧核糖核酸分子连接到5’磷酰基-核糖核酸分子的5’-端。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的分离的ATP依赖性DNA连接酶或其酶促活性片段，其中，所述DNA连接酶具有选自SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.7、SEQ ID No.8、SEQID No.10、SEQ ID No.11、SEQ ID No.16和SEQ ID No.17中任一项的氨基酸序列。

5.一种重组核酸分子，编码根据权利要求1至4中任一项所述的分离的ATP依赖性DNA连接酶或其酶促片段，或编码包含所述分离的ATP依赖性DNA连接酶或其酶促片段的蛋白质。

6.根据权利要求5所述的重组核酸分子，其中，所述核酸分子包含SEQ ID No.3、SEQ IDNo.9、SEQ ID No.12和SEQ ID No.18或者SEQ ID No.3、SEQ ID No.9、SEQ ID No.12和SEQID No.18的密码子优化序列，或者由SEQ ID No.3、SEQ ID No.9、SEQ ID No.12和SEQ IDNo.18或者SEQ ID No.3、SEQ ID No.9、SEQ ID No.12和SEQ ID No.18的密码子优化序列组成。

7.根据权利要求5所述的重组核酸分子，其中，所述核酸分子包含从SEQ ID No.3、SEQID No.9、SEQ ID No.12和SEQ ID No.18或者SEQ ID No.3、SEQ ID No.9、SEQ ID No.12和SEQ ID No.18的简并版本中任一项选择的核酸分子或者由该核酸分子组成。

8.一种载体，包含编码根据权利要求1至4中任一项所述的分离的ATP依赖性DNA连接酶或其酶促活性片段的核酸分子，或者包含根据权利要求5至7中任一项所述的核酸分子或由该核酸分子组成，其中所述载体是重组表达载体、克隆载体、质粒、病毒载体、粘粒、λ噬菌体或细菌人工染色体。

9.一种宿主细胞，包含根据权利要求8所述的载体，其中所述细胞是酵母细胞、昆虫细胞、人类细胞系或细菌细胞。

10.一种组合物，包含根据权利要求1至4中任一项所述的分离的ATP依赖性DNA连接酶或其酶促片段。

11.根据权利要求10所述的组合物，其中，所述组合物还包含缓冲剂，优选所述缓冲剂包含ATP和二价阳离子，其中所述二价阳离子优选为Mn²⁺或Mg²⁺。