[发明专利]用于生产异丁烯的方法和组合物在审
| 申请号： | 202180040927.6 | 申请日： | 2021-04-15 |
| 公开（公告）号： | CN115698276A | 公开（公告）日： | 2023-02-03 |
| 发明（设计）人： | B·布里格斯 | 申请（专利权）人： | 阿拉斯加大学安克雷奇分校 |
| 主分类号： | C12N9/12 | 分类号： | C12N9/12;C12N9/88;C12N15/10;C12N15/70;C12N15/90 |
| 代理公司： | 北京北翔知识产权代理有限公司 11285 | 代理人： | 苏萌;钟守期 |
| 地址： | 美国阿*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 生产 异丁烯 方法 组合 | ||
1.一种核酸序列，所述核酸序列包含：
a.第一大肠杆菌同源区，其中所述第一大肠杆菌同源区包含PAM突变；
b.组成型启动子；
c.甲羟戊酸-3-激酶(M3K)基因，所述基因包含与SEQ ID NO:1的序列具有至少90％同一性的序列；
d.甲羟戊酸二磷酸脱羧酶(MVD)基因，所述基因包含与SEQ ID NO:2的序列具有至少90％同一性的序列；以及
e.第二大肠杆菌同源区。
2.根据权利要求1所述的核酸序列，其中所述组成型启动子是16SrRNA启动子。
3.根据权利要求1所述的核酸序列，其中所述组成型启动子是T7A1启动子。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的核酸序列，其中所述第一大肠杆菌同源区和所述第二大肠杆菌同源区与大肠杆菌菌株MG1655同源。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的核酸序列，其中所述PAM突变是CAAA。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的核酸序列，其中所述MVD基因和所述M3K基因是可操作地连接的。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的核酸序列，其中所述核酸序列是线性的。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的核酸序列，其中所述M3K基因包含SEQ ID NO:1的序列。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的核酸序列，其中所述MVD基因包含SEQ ID NO:2的序列。
10.一种载体，所述载体包含根据权利要求1至9中任一项所述的核酸序列。
11.根据权利要求10所述的载体，其中所述载体是病毒载体。
12.根据权利要求10所述的载体，其中所述载体是质粒。
13.一种重组细胞，所述重组细胞包含核酸序列，其中所述核酸序列包含：
a.第一大肠杆菌同源区，其中所述第一大肠杆菌同源区包含PAM突变；
b.组成型启动子；
c.甲羟戊酸-3-激酶(M3K)基因，所述基因包含与SEQ ID NO:1的序列具有至少90％同一性的序列；
d.甲羟戊酸二磷酸脱羧酶(MVD)基因，所述基因包含与SEQ ID NO:2的序列具有至少90％同一性的序列；以及
e.第二大肠杆菌同源区。
14.根据权利要求13所述的重组细胞，其中所述核酸序列被整合至所述重组细胞的基因组中。
15.根据权利要求13至14中任一项所述的重组细胞，其中所述重组细胞是细菌细胞。
16.根据权利要求15所述的重组细胞，其中所述细菌细胞是大肠杆菌。
17.根据权利要求14至16中任一项所述的重组细胞，其中所述M3K基因和所述MVD基因是在已知具有较高表达水平的所述重组细胞基因组的区域中。
18.根据权利要求17所述的重组细胞，其中所述已知具有较高表达水平的基因组的区域是大肠杆菌的安全位点9区。
19.根据权利要求13至17中任一项所述的重组细胞，其中所述M3K基因和所述MVD基因是可操作地连接的。
20.根据权利要求13至19中任一项所述的重组细胞，其中所述M3K基因和所述MVD基因受所述组成型启动子控制。
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