[发明专利]大猩猩腺病毒核酸序列和氨基酸序列、含有其的载体及其用途

说明书

本发明涉及在普通人群中具有高免疫原性和具有非常低的预先存在的免疫力的新型腺病毒毒株。可检测的中和抗体的缺乏是由于腺病毒衣壳蛋白六邻体中存在新的高变区。本发明提供了这些新型腺病毒毒株的核苷酸序列和氨基酸序列、以及基于这些毒株的重组病毒、病毒样颗粒和载体。还提供了用于治疗或预防疾病的药物组合物和医药用途、以及利用新序列、重组病毒、病毒样颗粒和载体来生产腺病毒或病毒样颗粒的方法。

本发明涉及在普通人群中具有高免疫原性和具有非常低的预先存在的免疫力的新型腺病毒毒株。可检测的中和抗体的缺乏是由于腺病毒衣壳蛋白六邻体中存在新的高变区。本发明提供了这些新型腺病毒毒株的核苷酸序列和氨基酸序列、以及基于这些毒株的重组病毒、病毒样颗粒和载体。还提供了用于治疗或预防疾病的药物组合物和医药用途、以及利用新序列、重组病毒、病毒样颗粒和载体来生产腺病毒或病毒样颗粒的方法。

发明背景

腺病毒(Ad)包括在两栖动物、禽类和哺乳动物中发现的双链DNA病毒大家族，其具有非包封的二十面体衣壳结构(Straus,Adenovirus infections in humans；TheAdenoviruses,451-498,1984；Hierholzer等人，J.Infect.Dis.,158:804-813,1988；Schnurr和Dondero,Intervirology.,36:79-83,1993；Jong等人，J.Clin.Microbiol.,37:3940-3945:1999)。与逆转录病毒不同，腺病毒可以转导几种哺乳动物物种的多种细胞类型，包括分裂细胞和非分裂细胞，而不整合到宿主细胞的基因组中。

一般而言，腺病毒DNA通常非常稳定并保持游离型(例如染色体外)，除非转化发生或肿瘤发生。另外，腺病毒载体可以在明确限定的生产系统中繁殖到高产量，该制备系统易于适应临床级组合物的药物规模化制备。这些特征及其充分表征的分子遗传学使得重组腺病毒载体成为用作疫苗递送载体的理想候选物。重组腺病毒载体的制备可能依赖于包装细胞系的使用，该包装细胞系能够补充已经缺失或工程改造为无功能的腺病毒基因产物的功能。

目前，两种表征良好的人类C亚型腺病毒血清型(即hAd2和hAd5)被广泛用作用于基因治疗的大多数腺病毒载体的病毒骨架来源。复制缺陷型人腺病毒载体也已作为疫苗递送载体进行了测试，以用于递送来源于多种感染原的多种免疫原。在实验动物(例如啮齿动物、犬类和非人灵长类动物)中进行的研究表明，携带有编码免疫原以及其他抗原的转基因的重组复制缺陷型人腺病毒载体引发针对该转基因产物的体液和细胞介导的免疫应答。一般而言，研究人员已经报道了在非人类实验系统中使用使用人腺病毒载体作为疫苗递送载体的成功案例，其中通过使用预计会引发免疫应答的大剂量的重组腺病毒载体的免疫接种方案；或通过采用顺序施用衍生自不同血清型但携带与加强免疫接种相同的转基因产物的腺病毒载体的免疫接种方案进行免疫(Mastrangeli,等人，Human Gene Therapy,7:79-87(1996))。

衍生自物种C腺病毒的载体(例如Ad5、Ad6和ChAd3)具有最高的免疫原性(Colloca等人，Sci.Transl.Med.4(115),2012)。特别地，已经开发了用于基因治疗和疫苗应用的基于人源5型腺病毒(Ad5)的病毒载体。尽管基于Ad5的载体在动物模型中极为有效，但在临床试验中已证明人类针对Ad5野生型病毒(特别是针对如图1所示的衣壳)的预先存在的中和抗体降低了基因转导的效率(Moore JP等人，Science.2008May 9；320(5877):753-5)。这种抗体主要针对六邻体蛋白的高变区。一般人群中的免疫力限制了基于Ad5的Ad载体疫苗的广泛应用。另一方面，罕见的人腺病毒的免疫原性低于Ad5(Colloca等人，Sci.Transl.Med.4(115),2012)。基于非人腺病毒的载体在普通人群中具有非常低的预先存在的免疫力(Farina等人，J.Virol.75(23),11603-11613,2001)。一些非人腺病毒载体是已知的，但是由于针对这些载体的免疫可在人类中产生，因此对在人类中具有高免疫原性和低预存的中和抗体或不存在预存的中和抗体的其他腺病毒载体存在持续的需求。

发明内容