[发明专利]改善蛋白质表达的方法

说明书

本披露涉及包含编码免疫球蛋白重链的核苷酸序列的核酸，其中该免疫球蛋白重链中的一个或两个内含子的核苷酸序列缺失。这些核酸可用于增加免疫球蛋白表达。

技术领域

本披露涉及表达目标多肽的改良方法。包含编码免疫球蛋白重链的核苷酸序列和内含子缺失的核酸有助于增加免疫球蛋白的特定细胞生产力。

背景技术

DNA由内含子序列和外显子序列构成，其中内含子在mRNA加工期间通过剪接被去除。该加工与通过核孔复合物从细胞核中输出的mRNA出核密切相关。该出核是表达的基础，并在文献中有详细记载。参见Kohler A.等人，Nature Review Molecular Cell Biology[自然评论分子细胞生物学]8：761-773(2007)；Bjork，P.等人，Seminars in CellDevelopmental Biology[细胞与发育生物学研讨会]32：47-54(2014)：Reed，R.CurrentOpinion in Cell Biology[当代细胞生物学观点]，15：326-331(2003)。

已经观察到，与在该区域中没有内含子的相同核苷酸序列相比，在表达载体中编码的密码子优化的重链恒定区内存在内含子引起收获滴度提高。然而，与使用含有内含子的表达载体相关的风险是，在比如抗体或免疫球蛋白等目标蛋白质的表达期间可能会发生内含子保留和错误剪接事件，从而引起需要在纯化期间去除的不需要的异常蛋白质种类。如果在下游加工期间无法去除这些替代种类，这会增加纯化加工的额外复杂性和潜在的批次间差异。

已经表明，使用含有来自重链恒定区的内含子的非密码子优化的序列可以消除重链恒定区中剪接变体的出现。密码子优化引起的核苷酸序列变化被认为引入了隐蔽剪接，从而产生了这些替代种类。此外，已经表明，单独去除内含子中的每一个内含子(从而留下剩余的三个内含子中的两个)表现出收获滴度的惊人提高。

从免疫球蛋白重链恒定区去除一个或两个内含子可以降低内含子保留和错误剪接事件的风险，同时增加免疫球蛋白表达。这将产生新一代的表达载体，其在基于抗体或免疫球蛋白的重组蛋白的生产期间产生异常蛋白质种类的风险较低。

发明内容

本披露总体上涉及一种分离的核酸，其包含编码免疫球蛋白重链的核苷酸序列，其中免疫球蛋白重链恒定区的内含子2和内含子3的核苷酸序列缺失。

本披露还涉及一种分离的核酸，其包含编码免疫球蛋白重链的核苷酸序列，其中免疫球蛋白重链恒定区的一个内含子的核苷酸序列缺失。在一个方面，免疫球蛋白重链恒定区的内含子1的核苷酸序列缺失。在另一方面，免疫球蛋白重链恒定区的内含子2的核苷酸序列缺失。在另一方面，免疫球蛋白重链恒定区的内含子3的核苷酸序列缺失。

本披露还涉及一种分离的核酸，其包含编码免疫球蛋白重链的核苷酸序列，其中免疫球蛋白重链恒定区的两个内含子的核苷酸序列缺失。在一个方面，免疫球蛋白重链恒定区的内含子1和内含子2的核苷酸序列缺失。在另一方面，免疫球蛋白重链恒定区的内含子1和内含子3的核苷酸序列缺失。

本披露还涉及一种分离的核酸，其包含编码免疫球蛋白重链的核苷酸序列，其中免疫球蛋白重链恒定区的内含子1的核苷酸序列缺失，并且免疫球蛋白重链恒定区的内含子2和/或内含子3的核苷酸序列缺失，并且其中内含子2和/或内含子3的核苷酸序列经内含子1的核苷酸序列取代。在一个方面，免疫球蛋白重链恒定区的内含子2的核苷酸序列经内含子1的核苷酸序列取代。在一个方面，免疫球蛋白重链恒定区的内含子3的核苷酸序列经内含子1的核苷酸序列取代。

本披露还涉及一种分离的核酸，其包含编码免疫球蛋白重链的核苷酸序列，其中免疫球蛋白重链恒定区的内含子2和/或内含子3的核苷酸序列经内含子1的核苷酸序列替换。在一个方面，免疫球蛋白重链恒定区的内含子2的核苷酸序列经内含子1的核苷酸序列替换。在一个方面，免疫球蛋白重链恒定区的内含子3的核苷酸序列经内含子1的核苷酸序列替换。