[发明专利]用于mRNA递送的脂质纳米颗粒配制品

权利要求书

1.一种将信使RNA(mRNA)包裹在脂质纳米颗粒(LNP)中的方法，所述方法包括以下步骤：将(a)包含一种或多种mRNA的mRNA溶液与(b)包含一种或多种阳离子脂质、一种或多种非阳离子脂质和一种或多种PEG修饰的脂质的脂质溶液混合，并且其中混合所述mRNA溶液与所述脂质溶液的所述步骤包括在两亲性聚合物的存在下混合，以形成呈LNP配制品溶液的包裹在LNP内的mRNA(mRNA-LNP)。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述两亲性聚合物包含普朗尼克、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙二醇(PEG)或其组合。

3.根据权利要求2所述的方法，其中PEG选自三乙二醇单甲醚(mTEG)、甲氧基聚乙二醇mPEG、四乙二醇单甲醚、五乙二醇单甲醚或其组合。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述PEG是三乙二醇单甲醚(mTEG)。

5.根据权利要求1所述的方法，其中混合所述mRNA溶液与所述脂质溶液的所述步骤以大于25％体积/体积的浓度产生PEG。

6.根据权利要求1所述的方法，其中混合所述mRNA溶液与所述脂质溶液的所述步骤以约50％体积/体积的浓度包括PEG。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述mRNA溶液包含小于5mM的柠檬酸盐，并且其中所述mRNA-LNP的包裹效率大于60％。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述mRNA溶液和/或所述脂质溶液处于大约环境温度下。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述环境温度低于约35℃、低于约30℃、低于约26℃、低于约23℃、低于约21℃、低于约20℃或低于约18℃。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述环境温度的范围为约18-32℃、约21-26℃或约23-25℃。

11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一种或多种非阳离子脂质选自二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱(POPC)、棕榈酰油酰-磷脂酰乙醇胺(POPE)、二油酰-磷脂酰乙醇胺4-(N-马来酰亚胺基甲基)-环己烷-l-甲酸酯(DOPE-mal)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻酰磷酸乙醇胺(DMPE)、二硬脂酰-磷脂酰-乙醇胺(DSPE)、磷脂酰丝氨酸、鞘脂、脑苷脂、神经节苷脂、16-O-单甲基PE、16-O-二甲基PE、18-1-反式PE、l-硬脂酰-2-油酰-磷脂酰乙醇胺(SOPE)或其混合物。[]

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述一种或多种非阳离子脂质是二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)。

13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述mRNA溶液还包含海藻糖。

14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法不需要在所述混合步骤之前加热所述mRNA溶液和所述脂质溶液的步骤。

15.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述mRNA溶液包含每12L所述mRNA溶液大于约1g mRNA。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述mRNA溶液包含每8L所述mRNA溶液约1gmRNA。