[发明专利]借由细胞生产岩藻糖化的乳糖结构

权利要求书

1.一种用于生产2′，3-二岩藻糖基乳糖(DiFL)的方法，该方法包含以下步骤：

i)提供至少两种岩藻糖基转移酶，较佳至少一种α-1，2-岩藻糖基转移酶及至少一种α-1，3-岩藻糖基转移酶，及GDP-岩藻糖供体，其中所述岩藻糖基转移酶能够将岩藻糖残基自该GDP-岩藻糖供体转移至一或多种受体，及，

ii)使所述岩藻糖基转移酶及GDP-岩藻糖供体与包含受体乳糖及可能的一或多种其他受体的混合物在所述岩藻糖基转移酶催化岩藻糖残基自该GDP-岩藻糖供体转移至所述受体的条件下接触，由此产生DiFL及可能的2′FL及/或3FL，

iii)较佳地，分离该2′FL、3-FL及DiFL中的至少一者，更佳地，分离该2′FL、3-FL及DiFL中的全部。

2.如权利要求1的方法，其中该DiFL依该混合物中产生的2′FL、3-FL及DiFL的总量计所量测以至少80％的纯度存在于该反应混合物中。

3.如权利要求1或2中任一项的方法，其中所述岩藻糖基转移酶及该GDP-岩藻糖于无细胞系统中提供。

4.如权利要求1或2中任一项的方法，其中所述岩藻糖基转移酶及该GDP-岩藻糖借由细胞、较佳单个细胞、更佳代谢上经工程改造以用于生产DiFL或2′FL、3-FL及DiFL的混合物的单个细胞提供。

5.如权利要求1至4中任一项的方法，其中所述其他受体是选自包含2′FL及3-FL的清单。

6.如权利要求1、2、4或5中任一项的方法，该方法包含以下步骤：

a.提供细胞、较佳单个细胞，其中该细胞表现至少两种岩藻糖基转移酶，较佳至少一种α-1，2-岩藻糖基转移酶及至少一种α-1，3-岩藻糖基转移酶，所述岩藻糖基转移酶能够将岩藻糖残基自GDP-岩藻糖供体转移至该受体乳糖及可能的所述其他受体中的一或多种，且该细胞能够合成GDP-岩藻糖，其中该GDP-岩藻糖为用于所述岩藻糖基转移酶的供体，及

b.在容许表现所述岩藻糖基转移酶及合成该GDP-岩藻糖的条件下培养该细胞，

c.较佳地，自该培养分离该2′FL、3-FL或DiFL中的至少一者，更佳地，自该培养分离该2′FL、3-FL及DiFL中的全部。