[发明专利]通过靶向DUX4基因来治疗面肩肱型肌营养不良症(FSHD)的方法

权利要求书

1.一种多核苷酸，其包含以下碱基序列：

(a)编码核酸酶缺陷型CRISPR效应蛋白与转录阻遏物的融合蛋白的碱基序列，以及

(b)编码向导RNA的碱基序列，所述向导RNA靶向人DUX4基因的表达调控区中SEQ IDNO:2、3、4、20、51、68、144、148、152、162、164或167所示的连续区域。

2.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述编码向导RNA的碱基序列包含SEQ ID NO:2、3、4、20、51、68、144、148、152、162、164或167所示的碱基序列，或者其中缺失、替换、插入和/或添加1至3个碱基的SEQ ID NO:2、3、4、20、51、68、144、148、152、162、164或167所示的碱基序列。

3.根据权利要求1或2所述的多核苷酸，其包含至少两个不同的所述编码向导RNA的碱基序列。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的多核苷酸，其中所述转录阻遏物选自KRAB、MeCP2、SIN3A、HDT1、MBD2B、NIPP1和HP1A。

5.根据权利要求4所述的多核苷酸，其中所述转录阻遏物是KRAB。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的多核苷酸，其中所述核酸酶缺陷型CRISPR效应蛋白是dCas9。

7.根据权利要求6所述的多核苷酸，其中所述dCas9来源于金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的多核苷酸，其还包含所述编码向导RNA的碱基序列的启动子序列和/或所述编码核酸酶缺陷型CRISPR效应蛋白与转录阻遏物的融合蛋白的碱基序列的启动子序列。

9.根据权利要求8所述的多核苷酸，其中所述编码向导RNA的碱基序列的启动子序列选自U6启动子、SNR6启动子、SNR52启动子、SCR1启动子、RPR1启动子、U3启动子和H1启动子。

10.根据权利要求9所述的多核苷酸，其中所述编码向导RNA的碱基序列的启动子序列是U6启动子。

11.根据权利要求8至10中任一项所述的多核苷酸，其中所述编码核酸酶缺陷型CRISPR效应蛋白与转录阻遏物的融合蛋白的碱基序列的启动子序列是广泛性启动子或神经元特异性启动子。

12.根据权利要求11所述的多核苷酸，其中所述广泛性启动子选自EFS启动子、CMV启动子和CAG启动子。

13.一种载体，其包含根据权利要求1至12中任一项所述的多核苷酸。

14.根据权利要求13所述的载体，其中所述载体是质粒载体或病毒载体。

15.根据权利要求14所述的载体，其中所述病毒载体选自腺相关病毒(AAV)载体、腺病毒载体和慢病毒载体。

16.根据权利要求15所述的载体，其中所述AAV载体选自AAV1、AAV2、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、Anc80、AAV₅₈₇MTP、AAV₅₈₈MTP、AAV-B1、AAVM41和AAVrh74。

17.根据权利要求16所述的载体，其中所述AAV载体是AAV9。

18.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至12中任一项所述的多核苷酸或根据权利要求13至17中任一项所述的载体。