[发明专利]感染、活化及扩增免疫细胞的方法及组合物

权利要求书

1.一种假型γ逆转录病毒颗粒，其包含经修饰的RD114猫类内源性逆转录病毒包膜糖蛋白(RD114TR)和经修饰的狒狒包膜糖蛋白(BaEVTR)，其中：

a.RD114TR糖蛋白包含RD114糖蛋白的胞外结构域和跨膜结构域和双嗜性鼠类白血病病毒(MLV-A)糖蛋白的细胞质结构域；并且

b.其中BaEVTR糖蛋白包含狒狒包膜糖蛋白(BaEV)的胞外结构域和跨膜结构域和MLV-A糖蛋白的细胞质结构域，

任选地其中RD114TR和BaEVTR作为膜蛋白被并入γ逆转录病毒颗粒的包膜中；以及

另外任选地其中所述假型γ逆转录病毒颗粒进一步包含封装于所述包膜中的载体基因组、任选地逆转录酶和任选地整合酶，其中所述载体基因组包含侧接有两个长末端重复(LTR)的下列中的一个或多个：

(A)编码嵌合抗原受体(CAR)或另一种治疗性蛋白或多肽的多核苷酸，所述治疗性蛋白或多肽任选地选自抗体或其片段、酶、配体或受体，

(B)(A)的反向互补序列，或

(C)包括一个或多个识别位点的多核苷酸，所述识别位点任选地由适合于将CAR编码序列或其反向互补序列插入所述多核苷酸中的限制酶识别和切割。

2.根据权利要求1所述的假型γ逆转录病毒颗粒，其中所述载体基因组进一步包含下列中的一种或多种：5’LTR、5’帽、3’聚-A尾部和3’LTR。

3.根据权利要求1或2所述的假型γ逆转录病毒颗粒，其是选自下列物种中的任一种：莫洛尼鼠类白血病病毒(MMLV)、鼠类干细胞病毒(MSCV)、弗里德鼠类胚胎干细胞病毒(FMEV)、嗜异性MuLB相关病毒、猫类肉瘤病毒、嗜异性鼠类白血病病毒相关病毒(XMRV)和猫类白血病病毒。

4.一种制备自然杀伤(NK)细胞的群体的方法，其包含将包含下列中的一种或多种的细胞群体与免疫细胞活化剂(例如NK细胞活化剂)一起培养：NK细胞、能够衍生NK细胞的祖细胞或能够衍生NK细胞的干细胞，其中所述细胞群体在细胞群体中耗尽表达下列中的一种或多种的细胞：CD3、CD4、CD8、T细胞受体(TCR)α链、TCRβ链或αβTCR，并且其中所述免疫细胞活化剂选自下列(i)至(iv)中的一个或多个：

(i)人工抗原递呈细胞(aAPC)，其表达任选地活化和/或刺激免疫细胞生长的肿瘤相关抗原(TAA)或病毒抗原，

(ii)一种或多种抗体或其抗原结合片段，其特异性识别和结合NK细胞、祖细胞或干细胞中的一种或多种上的刺激受体，因此活化或增殖NK细胞，任选地其中所述抗体选自下列中的一种或多种：抗CD2抗体、抗CD16抗体、抗NKG2D抗体、抗DNAM-1抗体、抗2B4抗体、抗NTB-A抗体或抗NKp46(天然细胞毒性受体1(NCR1))抗体，

(iii)一种或多种因此活化或增殖NK细胞的细胞因子，或

(iv)一种或多种因此活化或增殖NK细胞的化学部分，其任选地选自mTOR抑制剂、PI3K抑制剂或STING活化环状二核苷酸(CDN)。

5.根据权利要求4所述的方法，其进一步包含下列步骤中的一项或两项：

将编码CAR或另一种任选地选自抗体或其片段、酶、配体或受体的治疗性蛋白或多肽的多核苷酸引入培养的细胞群体中用于表达，其中所述CAR特异性识别和结合所述肿瘤相关抗原(TAA)或病毒抗原；或

在权利要求4的引入步骤之后将细胞群体与免疫细胞活化剂一起培养，其中所述免疫细胞活化剂是选自下列(i)至(iv)中的一个或多个：

(i)人工抗原递呈细胞(aAPC)，其表达任选地活化和/或刺激免疫细胞生长的肿瘤相关抗原(TAA)或病毒抗原，

(ii)一种或多种抗体或其抗原结合片段，其特异性识别和结合NK细胞、祖细胞或干细胞中的一种或多种上的刺激受体，因此活化或增殖NK细胞，

(iii)一种或多种因此活化或增殖NK细胞的细胞因子，或

(iv)一种或多种因此活化或增殖NK细胞的化学部分，其任选地选自mTOR抑制剂、PI3K抑制剂或STING活化环状二核苷酸(CDN)，

任选地其中使用相同或不同的免疫细胞活化剂或其组合重复培养步骤一次、两次、三次或更多次。