[发明专利]借由细胞制造寡糖混合物

权利要求书

1.一种借由细胞且较佳为单一细胞制造至少两种不同寡糖的混合物的方法，该方法包含以下步骤：

i.提供能够表现糖基转移酶且能够合成核苷酸-糖的细胞，较佳单一细胞，其中该核苷酸-糖为用于该糖基转移酶的供体，及

ii.在容许表现该糖基转移酶及合成该核苷酸-糖的条件下培养该细胞，及

iii.向该培养中添加至少两种受体，使得该细胞能够制造至少两种寡糖，较佳地，所述受体中的任一者为双糖或寡糖，

iv.较佳地，自该培养分离所述寡糖中的至少一者，更佳地，自该培养分离所述寡糖中的全部。

2.如权利要求1的方法，其中所述受体中的任一者为双糖或哺乳动物乳寡糖(mammalian milk oligosaccharide；MMO)，较佳地，所述受体中的任一者为哺乳动物乳寡糖。

3.如权利要求1或2中任一项的方法，其中该细胞为经代谢工程改造以制造该混合物的细胞及/或经至少一种基因表现模组修饰，其中来自该至少一种表现模组中的任一者的表现为持续型的或借由天然诱导物产生。

4.如权利要求1至3中任一项的方法，其中该细胞包含编码一种蛋白质的同一编码DNA序列的多个复本。

5.如权利要求1至4中任一项的方法，其中该细胞制造三种或更多种不同寡糖的混合物。

6.如权利要求1至5中任一项的方法，其中该细胞制造不同寡糖的混合物，其中至少两种寡糖在聚合度方面不同。

7.如权利要求1至6中任一项的方法，其中该糖基转移酶选自包含以下者的清单：岩藻糖基转移酶、唾液酸基转移酶、半乳糖基转移酶、葡萄糖基转移酶、甘露糖基转移酶、N-乙酰基葡萄糖胺基转移酶、N-乙酰基半乳糖胺基转移酶、N-乙酰基甘露糖胺基转移酶、木糖基转移酶、葡萄糖醛酸苷转移酶、半乳糖醛酸苷转移酶、葡萄糖胺基转移酶、N-羟乙酰基神经胺基转移酶、鼠李糖基转移酶、N-乙酰基鼠李糖基转移酶、UDP-4-胺基-4,6-二去氧-N-乙酰基-β-L-阿卓糖胺(altrosamine)转胺酶、UDP-N-乙酰基葡萄糖胺烯醇丙酮酰基(enolpyruvyl)转移酶及岩藻糖胺基转移酶，

-较佳地，该岩藻糖基转移酶选自包含以下者的清单：α-1,2-岩藻糖基转移酶、α-1,3-岩藻糖基转移酶、α-1,4-岩藻糖基转移酶及α-1,6-岩藻糖基转移酶，

-较佳地，该唾液酸基转移酶选自包含以下者的清单：α-2,3-唾液酸基转移酶、α-2,6-唾液酸基转移酶及α-2,8-唾液酸基转移酶，

-较佳地，该半乳糖基转移酶选自包含以下者的清单：β-1,3-半乳糖基转移酶、N-乙酰基葡萄糖胺β-1,3-半乳糖基转移酶、β-1,4-半乳糖基转移酶、N-乙酰基葡萄糖胺β-1,4-半乳糖基转移酶、α-1,3-半乳糖基转移酶及α-1,4-半乳糖基转移酶，

-较佳地，该葡萄糖基转移酶选自包含以下者的清单：α-葡萄糖基转移酶、β-1,2-葡萄糖基转移酶、β-1,3-葡萄糖基转移酶及β-1,4-葡萄糖基转移酶，

-较佳地，该甘露糖基转移酶选自包含以下者的清单：α-1,2-甘露糖基转移酶、α-1,3-甘露糖基转移酶及α-1,6-甘露糖基转移酶，

-较佳地，该N-乙酰基葡萄糖胺基转移酶选自包含以下者的清单：半乳糖苷β-1,3-N-乙酰基葡萄糖胺基转移酶及β-1,6-N-乙酰基葡萄糖胺基转移酶，

-较佳地，该N-乙酰基半乳糖胺基转移酶为α-1,3-N-乙酰基半乳糖胺基转移酶。

8.如权利要求1至7中任一项的方法，其中该细胞在该糖基转移酶的表现或活性方面经修饰。

9.如权利要求1至8中任一项的方法，其中该糖基转移酶为岩藻糖基转移酶且该供体核苷酸-糖为GDP-岩藻糖(GDP-Fuc)。

10.如权利要求1至9中任一项的方法，其中糖基转移酶为唾液酸基转移酶且该供体核苷酸-糖为CMP-N-乙酰基神经氨酸(CMP-Neu5Ac)。