[发明专利]衰老细胞判定系统

说明书

本发明提供非破坏性且迅速地判定成肌细胞等培养目标细胞的衰老程度的手段。对于在培养液中贴附于培养基材表面时细胞质在培养基材上铺展的该铺展而言，越是衰老程度高的细胞则铺展得越广，利用这一点基于亮度、反射率或图像处理结果来检测铺展的程度，从而判定衰老的程度。也可以根据铺展的速度来判别衰老的程度。

技术领域

本发明涉及进行用于培养目标细胞的细胞制品的、衰老细胞的判定的系统。

背景技术

近年来，为了修复损伤的组织等，进行了移植各种细胞的尝试。例如，为了修复因心绞痛、心肌梗塞等缺血性心脏病而损伤的心肌组织，尝试了利用胎儿心肌细胞、骨骼肌成肌细胞、间充质干细胞、心脏干细胞、ES细胞、iPS细胞等(非专利文献1)。

作为这样的尝试的一环，开发了：利用支架而形成的细胞结构物；将细胞形成为片状而得的片状细胞培养物(非专利文献2)。

关于片状细胞培养物在治疗中的应用，进行了下述研究：培养表皮片在由烧伤等引起的皮肤损伤中的利用、角膜上皮片状细胞培养物在角膜损伤中的利用、口腔黏膜片状细胞培养物在食道癌的内镜下的切除中的利用等，其中一部分已进入临床应用的阶段。

这样的治疗中使用的骨骼肌成肌细胞通常从要移植的对象的骨骼肌组织中分离骨骼肌成肌细胞及肌卫星细胞等CD56阳性细胞而得到，作为使得从骨骼肌组织分离的细胞中包含的CD56阳性细胞的比例提高的策略，例如，已知下述方法等：将骨骼肌组织在蛋白质降解酶溶液中浸渍规定的时间来进行酶处理，将得到的酶处理液废弃后，再次在蛋白质降解酶溶液中浸渍规定的时间来进行酶处理，将得到的酶处理液中包含的细胞回收(专利文献1)。

在将骨骼肌成肌细胞制成例如作为用于制作片状细胞培养物的材料的细胞制品的情况下，对细胞进行培养使细胞数增加，但若细胞衰老，则增殖在中途停止，无法得到一定数目的细胞。

为了避免这样的风险，需要判定供于培养的细胞的衰老程度，对作为判定对象的含细胞的液体中的、衰老细胞的含有率是否在容许范围内进行判定。

以往，为了知晓用于细胞培养的细胞的衰老程度，将包含细胞的液体的一部分取样后进行分析检查，因此不能说是非破坏检查，细胞的一部分因检查而损失。另外，分析耗费时间。

作为在细胞存活的状态下判定分裂的活跃度的技术，使用即使结合、细胞也不会死亡的色素进行显微镜观察的技术是已知的(专利文献2)。

然而，该观察法是人进行显微镜观察来判别，无法自动地判别例如大量的对象细胞。另外，还存在下述这样的问题：判断耗费大量时间；人进行目视观察的情况下，判断产生偏差。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2007-89442号公报

专利文献2：日本特开平8-136536号公报

非专利文献

非专利文献1：Haraguchi等人,StemCells Transl Med.2012Feb；1(2):136-41

非专利文献2：Sawa等人,Surg Today.2012Jan；42(2):181-4

发明内容

发明所要解决的课题

以往，在想要将培养的细胞以细胞制品的形式供给的情况下，若包含在进一步培养细胞制品时增殖在中途停止这样的衰老的细胞，则作为细胞制品是不合格的，因此需要预先判定细胞制品的衰老程度，若能够非破坏性地进行判定，则能够在不损失细胞的情况下避免供给不合格品的风险，这样的判定是令人期待的。

另外，期望非破坏性细胞衰老判定能够迅速简便地进行。此外，对于衰老程度的判定，期望没有偏差的精度高的判定。