[发明专利]诱导产生RAAV病毒粒子的稳定细胞系

权利要求书

1.一种由以下部分组成的细胞：

a)编码AAV Rep蛋白和AAV Cap蛋白的第一个多核苷酸构建体；

b)编码一个或多个腺病毒辅助蛋白的第二个多核苷酸构建体；

其中，当一个或多个核酸整合至哺乳动物细胞的核基因组中时，可有条件地表达AAVRep蛋白、AAV Cap蛋白和/或一个或多个腺病毒辅助蛋白，从而有条件地产生重组AAV(rAAV)病毒粒子。

2.权利要求1所述的细胞，其中，第二个多核苷酸构建体包含以下编码序列：

a)一个或多个辅助蛋白；

b)位于一个或多个辅助蛋白上游的自激发元件；以及

c)位于自切元件上游的诱导型启动子。

3.权利要求2所述的细胞，其中，通过操纵将自切元件连接至诱导型启动子。

4.权利要求2或3所述的细胞，其中，自切元件的表达是由诱导型启动子驱动的。

5.权利要求2-4中任一项所述的细胞，其中，诱导型启动子是四环素反应性启动子元件(TRE)。

6.权利要求5所述的细胞，其中，TRE包含与最小启动子融合的Tet操纵子(tetO)序列多联体。

7.权利要求6所述的细胞，其中，最小启动子是人巨细胞病毒启动子。

8.权利要求3-7中任一项所述的细胞，其中，诱导型启动子包含与SEQ ID NO:22具有至少70％、80％、90％、95％、99％或100％同源性的序列。

9.权利要求3-8中任一项所述的细胞，其中，在与激活剂结合后，将从诱导型启动子中激活转录过程。

10.权利要求9所述的细胞，其中，当存在第一触发剂时，激活剂与诱导型启动子结合。

11.权利要求1-10中任一项所述的细胞，其中，第二个多核苷酸构建体进一步包含激活剂编码序列。

12.权利要求9-11中任一项所述的细胞，其中，可通过操纵将激活剂连接至组成型启动子。

13.权利要求12所述的细胞，其中，组成型启动子是E1α启动子或人巨细胞病毒启动子。

14.权利要求13所述的细胞，其中，E1α启动子包含至少一个突变。

15.权利要求12-14中任一项所述的细胞，其中，组成型启动子包含与SEQ ID NO:20具有至少70％、80％、90％、95％、99％或100％同源性的序列。

16.权利要求9-15中任一项所述的细胞，其中，激活剂是反向四环素控制性反式激活子(rTA)，包含与VP16转导结构域融合的Tet Repressor结合蛋白(TetR)。

17.权利要求16所述的细胞，其中，rTA包含tetR DNA结合部分中的四个突变。

18.权利要求16或17所述的细胞，其中，rTA包含一个与SEQ ID NO:21具有至少70％、80％、90％、95％、99％或100％同源性的序列。

19.权利要求2-4中任一项所述的细胞，其中，诱导型启动子是一个cumate操纵子序列。

20.权利要求19所述的细胞，其中，cumate操纵子序列位于组成型启动子的下游。