[发明专利]直接从微孔板的全血或其他生物样本中对免疫细胞自动取样的方法

说明书

一种从沉积在微孔板的孔中的生物液体样本(例如全血)自动对免疫细胞取样的方法。样本包含红细胞(RBC)和磁珠，所述磁珠被设计用于与RBC结合。所述微孔板放置在具有包括至少一个磁体的磁性适配器的振荡器上。所述磁体使得与磁珠结合的RBC被吸引并迁移到孔壁(例如，底部或侧壁)，并保持在壁上。然后，操作振荡器以一种方式摇动微孔板一段时间，以便于孔区域内的生物液体样本中的免疫细胞基本均匀或均匀地悬浮，而RBC仍保持在孔壁上，从而使免疫细胞基本上与孔区域的RBC分离。在摇动期间或摇动后，样品探针随后下降到孔的区域，以回收一部分含有免疫细胞的样本。

交叉引用

本申请请求于2020年9月1日提交的申请号为17/009,225的美国非临时专利的优先权，该申请通过引用并入本文。

背景技术

本申请涉及一种直接对细胞取样的方法，如来自加载到微孔板孔中的生物液体样本的免疫细胞(淋巴细胞、中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞或通常为无粒白细胞或白细胞(WBC))。本方法的一个具体应用是从全血样本中直接对免疫细胞取样。所述方法也适用于从可能含有红细胞(RBC)的其他生物液体样本(例如囊液样本、羊水、骨髓样本或脑脊液样本)中直接对免疫细胞取样。

术语“微孔板”用来指以平板的形式形成由许多小的单个样品保持孔组成的阵列的测试设备版式，通常为每个板6、12、24、48、96、384或更多个孔，或指测试管阵列形式的测试设备版式，通常一个阵列中有40个测试管。所述术语有时在本领域中被称为“微量滴定板”或“微板”。

这种微孔板通常与样本处理装置结合使用，所述装置自动从其中一个孔中提取一部分样本，并将样本引入分析仪器，例如流式细胞仪、血液分析仪、细胞分选仪、质谱仪等，这些仪器对提取的样本进行一次或多次测量。

因为全血容易阻塞小的流动通道，使用细胞仪对全血进行取样从而进行白细胞(WBC)分析是困难的。此外，众所周知，传统细胞仪难以区分WBC和RBC群体。因此，本领域已经开发了从全血样本中去除RBC的方法。一种方法，使用缓冲溶液，如氯化铵裂解红细胞(RBC)，氯化铵裂解RBC对白细胞的影响最小。使用传统RBC裂解方法在微板版式中进行全血样本处理需要大量人力，它产生RBC碎片，所述RBC碎片可以堵塞细胞仪流动细胞，使细胞仪污染严重，并显著增加从一个样本到另一个样本的携带量。此外，RBC裂解法可能导致数据完整性损失，因为裂解中使用的低渗缓冲液不是生理性的，这可能影响正常免疫细胞活性。

另一种方法，传统梯度离心法，可用于WBC的纯化，所述方法用于测试管版式的样本，但不适用于微板版式。

本领域需要一种从微孔板版式的含有RBC的样本或其他生物液体样本中自动对免疫细胞取样的方法。

发明内容

在本申请的一个方面，提供了一种用于从沉积在微孔板的孔中的生物液体样本中对细胞，如免疫细胞自动取样的方法，所述孔具有壁(即底壁或侧壁)。例如，所述样本包含(1)RBC和(2)磁珠，所述磁珠与抗体结合或被设计用于与样本中的RBC结合。所述方法包括以下步骤：a)将微孔板放置在具有包含磁体的磁性适配器的振荡器上，其中所述磁体使得结合在磁珠上的RBC被吸引并迁移到孔壁，并保持在壁上；(b)用振荡器以一种方式摇动微孔板一段时间，以便于基本均匀或均匀地悬浮孔区域内的生物液体样本中的免疫细胞，而RBC仍保持在孔壁上，从而免疫细胞与孔区域的RBC分离；(c)将样本探针下调到孔的孔区域中，并从该区域回收一部分含有免疫细胞的样本。

在另一方面，振荡器系统为具有顶面的振荡器，所述顶面被配置为以受控和可编程的方式摇动微孔板。所述振荡器包括一个与振荡器上的结构配合的磁性适配器，以便其可拆卸地安装到振荡器的顶面。所述磁性适配器为保持单个磁体阵列的基本平坦结构，其中所述磁性适配器被配置为安装在振荡器的顶面上，并夹在振荡器顶面和微孔板之间。

在一种配置中，所述磁体阵列布置在磁性适配器中，因此当微孔板放置在磁性适配器顶部时，磁体阵列与微孔板的孔的底部对齐。