[发明专利]用于生产改良啤酒花产品的酶促方法

权利要求书

1.一种制备二氢-(ρ)-异α酸的方法，所述方法包括用酮还原酶或表达编码所述酮还原酶的基因的微生物处理异α酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法在含水体系中进行。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述方法在温和的温度和pH条件下进行。

4.根据权利要求1所述的方法，所述方法包括将酮还原酶和NADPH或NADP加入异α酸的混合物中，然后孵育。

5.根据权利要求1所述的方法，所述方法包括在用于辅因子再循环的异丙醇的存在下将所述酮还原酶和NADPH或NADP加入异α酸的混合物中，然后孵育。

6.根据权利要求1所述的方法，其中将异α酸即底物的浓度最大化，以增加生物转化的体积生产率。

7.根据权利要求1所述的方法，其中将混合物中的辅因子NADPH或NADP的浓度最小化，以提高生物转化的经济性。

8.根据权利要求1所述的方法，其中反应在使用惰性气体诸如氮气或氩气清除空气的容器中进行，以防止产生降解产物。

9.根据权利要求1所述的方法，所述方法包括在用于辅因子再循环的另一种酶的存在下将所述酮还原酶和NADPH或NADP加入异α酸的混合物中，然后孵育。

10.根据权利要求1所述的方法，所述方法包括将全细胞生物催化剂加入异α酸的混合物中，然后孵育，其中所述全细胞生物催化剂是表达编码酮还原酶的基因的固定化微生物。

11.根据权利要求1所述的方法，所述方法包括用表达编码所述酮还原酶的基因的生长的微生物处理异α酸。

12.根据权利要求1所述的方法，所述方法包括将所述酮还原酶加入其中加热的异α酸的提取物中，并孵育所述混合物，其中所述酮还原酶是热稳定的。

13.根据权利要求1所述的方法，其中所述酮还原酶特异性还原顺式异葎草酮、顺式异合葎草酮和顺式异加葎草酮。

14.根据权利要求1所述的方法，其中所述酮还原酶特异性还原反式异葎草酮、反式异合葎草酮和反式异加葎草酮。

15.根据权利要求1所述的方法，所述方法包括加入两种或更多种酮还原酶的混合物，以将顺式异α酸和反式异α酸的混合物还原为它们各自的二氢异α酸。

16.根据权利要求14所述的方法，其中所述两种或更多种酮还原酶的混合物产生独特的二氢异α酸混合物，所述二氢异α酸混合物不同于化学还原剂例如硼氢化钠产生的混合物。

17.根据权利要求1所述的方法，其中所述酮还原酶包含SEQ ID NO:172、SEQ ID NO:186、SEQ ID NO:194、SEQ ID NO:196、SEQ ID NO:252、SEQ ID NO:270、SEQ ID NO:272、SEQID NO:286、SEQ ID NO:300、SEQ ID NO:328、SEQ ID NO:330、SEQ ID NO:346、SEQ ID NO:348、SEQ ID NO:356、SEQ ID NO:414或SEQ ID NO:416的氨基酸序列。

18.根据权利要求1所述的方法，其中所述酮还原酶与选自SEQ ID NO:172、SEQ ID NO:186、SEQ ID NO:194、SEQ ID NO:196、SEQ ID NO:252、SEQ ID NO:270、SEQ ID NO:272、SEQID NO:286、SEQ ID NO:300、SEQ ID NO:328、SEQ ID NO:330、SEQ ID NO:346、SEQ ID NO:348、SEQ ID NO:356、SEQ ID NO:414和SEQ ID NO:416的酮还原酶99％、95％、90％、85％、80％、75％或70％同源。