[发明专利]粒径受控的β-葡聚糖与核酸的复合物

说明书

本发明提供粒径受控的β(1→3)葡聚糖与核酸的复合物。本发明还提供粒径受控的β(1→3)葡聚糖与核酸的复合物。

技术领域

本发明涉及一种粒径受控的β-葡聚糖与核酸形成的复合物。

背景技术

CpG寡核苷酸(CpG ODN)是含有免疫刺激性的CpG基序的约20个碱基的单链合成DNA。Toll样受体9(TLR9)被鉴定为CpG ODN的宿主受体，经由TLR9激活自然免疫，诱导I型干扰素(以下，记作I型IFNs)和炎性细胞因子(非专利文献1、2)。TLR9在浆细胞样树突细胞(plasmacytoid dendritic cells。以下，记作pDCs)和B细胞的内体(endosome)内表达，pDCs或B细胞摄入的CpG ODN与存在于内体内的TLR9相互作用，激活自然免疫(非专利文献2)。

希望利用CpG ODN所诱导的I型IFNs或炎性细胞因子，开发用于预防或治疗感染症、癌症、哮喘和花粉症等疾病的新的免疫疗法剂(非专利文献2、3)。作为已实用化的包含CpG ODN的药品，可列举：作为乙型肝炎疫苗的Heplisav-B(R)。Heplisav-B(R)是预防乙型肝炎病毒(以下，记作HBV)感染的疫苗，CpG ODN作为疫苗佐剂来添加。与现有的作为添加了铝佐剂的乙型肝炎疫苗的Engerix-B(R)相比，发现Heplisav-B(R)有可能显示高的药效，由此暗示了：与疫苗中最常使用的铝佐剂相比，CpG ODN有可能具有高的疫苗佐剂活性(非专利文献4)。另外，利用了CpG ODN的抗癌活性的临床试验也在进行，作为针对转移性黑色素瘤的治疗药的开发也在进行(非专利文献5)。

存在骨架序列和免疫刺激特性各不相同的至少4种类型的CpG ODN(非专利文献6)。被称为A型或D型的CpG ODN典型的是包含1个回文结构的CpG基序连同磷酸二酯(PO)骨架和硫代磷酸酯(PS)聚G尾，激活pDCs以产生大量的IFN-α，但无法诱导pDCs的成熟或B细胞激活(非专利文献7、8)。被称为B型或K型的CpG ODN由PS骨架构成，其中多数含有非回文结构的多个CpG基序，激活B细胞以产生IL-6等炎性细胞因子，激活pDCs以使其成熟，但不会诱导IFN-α产生(非专利文献8、9)。专利文献1中记载了多个K型CpG ODN。作为除此之外的CpGODN的类型的C型和P型分别含有1个和2个回文结构CpG序列，两者均可像K型那样激活B细胞，而且还可像D型那样激活pDCs，但与P型CpG ODN相比，C型CpG ODN更弱地诱导IFN-α产生(非专利文献10-12)。

D型和P型CpG ODN形成以下高级结构：形成被称为G-四联体(G-tetrads)的平行四链结构的Hoogsteen碱基对和顺式回文结构部位与反式回文结构部位之间的Watson-Crick碱基对的高级结构，这些结构对于pDCs产生强效的IFN-α是必需的(非专利文献12-14)。认为这些高级结构对于初期在内体内的局部化或由TLR9介导的信息传递是必需的，但认为缺点是成为CpG ODN的多型性和聚集的原因，其结果，妨碍D型和P型CpG ODN的临床应用(非专利文献15)。另一方面，K型和C型CpG ODN未被发现聚集等制造中的障碍，认为可用作人用的免疫疗法剂和疫苗佐剂(非专利文献16和17)。另外，报道了K型CpG ODN在人临床试验中提高以感染症和癌症为目标的疫苗的免疫原性的结果(非专利文献6、16)。

作为来自裂褶菌(Schizophyllum commune)的可溶性β(1→3)葡聚糖的裂褶菌多糖(schizophyllan)(以下，称为SPG)作为宫颈癌患者的放射疗法的刺激剂在日本有临床使用的历史记录(非专利文献18)。同样，作为来自香菇的可溶性β(1→3)葡聚糖的香菇多糖(lentinan)(以下，记作LNT)是1985年批准的药品，对于不能手术和复发的胃癌患者通过与氟嘧啶类药剂并用来使用(非专利文献19、20)。研究显示：β(1→3)葡聚糖与聚脱氧腺苷(以下，称为聚(dA))形成三重螺旋结构的复合物(非专利文献21)。