[发明专利]靶向实体瘤的多重工程改造的iPSC和免疫效应细胞

权利要求书

1.一种细胞或其群体，其中所述细胞是真核细胞、动物细胞、人细胞、免疫细胞、诱导多能细胞(iPSC)、克隆iPSC或由其分化的衍生细胞，并且其中所述细胞包含：

(i)编码转基因TCRα链(tgTCRα)的多核苷酸；和

(ii)编码转基因TCRβ链(tgTCRβ)的多核苷酸，其中所述tgTCRα链和所述tgTCRβ链形成识别第一肿瘤抗原的外源TCR复合体(TCR^exo)；以及任选地，

(iii)一种或多种另外的外源多核苷酸，所述一种或多种另外的外源多核苷酸包含编码至少靶向第二肿瘤抗原的嵌合抗原受体(CAR)或衔接子的多核苷酸。

2.根据权利要求1所述的细胞或其群体，其中：

(i)编码所述tgTCRα链的所述多核苷酸和编码所述tgTCRβ链的所述多核苷酸包含在双顺反子构建体中，并且任选地其中：

(a)将所述构建体插入在TCRα或TCRβ(TRAC或TRBC)的恒定区处；

(b)所述构建体的所述插入破坏了内源TCRα或TCRβ在所述插入位点处的表达；和/或

(c)所述构建体的表达由TCR的内源启动子或外源启动子驱动；或者

(ii)将编码所述CAR或所述衔接子的所述多核苷酸插入在TRAC或TRBC处，并且任选地其中：

(a)编码所述CAR或所述衔接子的所述多核苷酸的所述插入破坏了所述内源TCRα或TCRβ在所述插入位点处的表达；和/或

(b)所述CAR或所述衔接子的表达由TCR的内源启动子或外源启动子驱动；或者

(iii)将编码所述tgTCRα链和所述tgTCRβ链、所述CAR或所述衔接子的所述多核苷酸或者所述一种或多种另外的多核苷酸插入在一个或多个安全港基因座或所选基因座中。

3.根据权利要求2所述的细胞或其群体，(I)其中将所述构建体以及编码所述CAR或所述衔接子的所述多核苷酸各自插入在TCRα或TCRβ(TRAC或TRBC)的恒定区处，但不插入在同一恒定区处，从而破坏内源TCRα和TCRβ两者的表达，敲除所述内源TCR，并避免错配的TCR，包含：

(a)所述转基因TCRα和所述内源TCRβ，或者

(b)所述转基因TCRβ和所述内源TCRα；

或者(II)其中所述构建体以及编码所述CAR或所述衔接子的所述多核苷酸各自整合在包含安全港基因座或所选基因座的基因座处。

4.根据权利要求3所述的细胞或其群体，其中：

(i)所述安全港基因座包括AAVS1、CCR5、ROSA26、胶原蛋白、HTRP、H11、GAPDH或RUNX1中的至少一者；

(ii)所选基因座是B2M、TAP1、TAP2、TAP相关蛋白、NLRC5、CIITA、RFXANK、RFX5、RFXAP、TCR、NKG2A、NKG2D、CD38、CD25、CD69、CD44、CD58、CD54、CD56、CD69、CD71、CIS、CBL-B、SOCS2、PD1、CTLA4、LAG3、TIM3或TIGIT中的一者；和/或

(iii)所述外源多核苷酸的所述整合敲除了所述基因座中的所述基因的表达。