[发明专利]靶向EPCAM和ICAM-1的双嵌合抗原受体

权利要求书

1.一种双嵌合抗原受体(CAR)，所述双CAR包含：

(a)针对EpCAM的单链可变片段(scFv)，

(b)与ICAM-1结合的人淋巴细胞功能相关抗原-1的α_L亚基的I结构域，

(c)至少一个跨膜结构域，

(d)至少一个共刺激结构域，和

(iv)至少一个激活结构域。

2.根据权利要求1所述的双CAR，所述双CAR包含靶向EpCAM的EpCAM CAR和靶向ICAM-1的ICAM-1 CAR，其中所述EpCAM CAR包含针对EpCAM的scFv、一个跨膜结构域、一个或多个共刺激结构域和一个激活结构域，并且所述ICAM-1 CAR包含I结构域、一个跨膜结构域、一个或多个共刺激结构域和一个激活结构域。

3.根据权利要求1所述的双CAR，所述双CAR从N末端到C末端包含针对EpCAM的scFv、I结构域、跨膜结构域、一个或多个共刺激结构域和激活结构域。

4.根据权利要求1所述的双CAR，所述双CAR从N末端到C末端包含I结构域、针对EpCAM的scFv、跨膜结构域、一个或多个共刺激结构域和激活结构域。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的双CAR，其中所述CAR以约50nM至50μM的亲和力与EpCAM结合。

6.根据权利要求5中任一项所述的双CAR，其中所述CAR以约80nM至20μM的亲和力与EpCAM结合。

7.根据权利要求1至4中任一项所述的双CAR，其中所述针对EpCAM的scFv包含SEQ IDNO：9的氨基酸序列的重链可变CDR1、SEQ ID NO：10的氨基酸序列的重链可变CDR2和SEQ IDNO：2、3、4、5、6、7或8的氨基酸序列的重链可变CDR3。

8.根据权利要求7所述的双CAR，其中所述针对EpCAM的scFv包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的轻链可变CDR1、SEQ ID NO：12的氨基酸序列的轻链可变CDR2和SEQ ID NO：13的氨基酸序列的轻链可变CDR3。

9.根据前述权利要求中任一项所述的双CAR，其中所述CAR以约50nM至约50μM的亲和力与ICAM-1结合。

10.根据权利要求9所述的双CAR，其中所述I结构域包含SEQ ID NO：1的130-310个氨基酸的序列，具有F292A、F292S、L289G、F265S或F292G的一个突变，其中氨基酸残基的编号对应于SEQ ID NO：1的氨基酸残基。

11.根据权利要求9所述的双CAR，其中所述I结构域包含SEQ ID NO：1的130-310个氨基酸的序列，具有K287C和K294C的两个突变，其中所述氨基酸残基的编号对应于所述SEQ IDNO：1的氨基酸残基。

12.根据前述权利要求中任一项所述的双CAR，其中所述共刺激结构域选自CD28、4-1BB、ICOS-1、CD27、OX-40、GITR和DAP10。

13.根据前述权利要求中任一项所述的双CAR，其中所述激活结构域是CD3ζ。

14.根据前述权利要求中任一项所述的双CAR，所述双CAR还包含报道分子生长抑素2型受体(SSTR2)。

15.一种分离的核酸序列，所述分离的核酸序列编码根据前述权利要求中任一项所述的双CAR。

16.T细胞或自然杀伤细胞，所述T细胞或自然杀伤细胞经修饰以表达根据前述权利要求中任一项所述的双CAR。