[发明专利]一种鲑鱼促性腺激素释放激素类似物中L-精氨酸残留量的柱前手性衍生测定方法

权利要求书

1.一种鲑鱼促性腺激素释放激素类似物中L-精氨酸残留量的测定方法，包括样品前处理和液相检测，其他特征在于样品前处理中，对照品DL-精氨酸及D-精氨酸中加入衍生剂处理；供试品是鲑鱼促性腺激素释放激素类似物水解制备得到后加入衍生剂处理；所述的衍生剂是1%Nα-(2,4-二硝基-5-氟苯基)-L-丙氨酰胺的丙酮溶液并加入0.5mol/L NaHCO3溶液作为缚酸剂。

2.根据权利要求1所述的一种鲑鱼促性腺激素释放激素类似物中L-精氨酸残留量的测定方法，其特征在于所述的DL-精氨酸和衍生剂的浓度比为1：1.2~1.7。

3.根据权利要求2所述的一种鲑鱼促性腺激素释放激素类似物中L-精氨酸残留量的测定方法，其特征在于所述的DL-精氨酸和衍生剂的浓度比在1：1.5。

4.根据权利要求1所述的一种鲑鱼促性腺激素释放激素类似物中L-精氨酸残留量的测定方法，其特征在于液相检测时的液相条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相是甲醇：水=40:60；柱温35℃；流速为每分钟1.0ml；检测波长340nm，进样量50μl。

5.根据权利要求1所述的一种鲑鱼促性腺激素释放激素类似物中L-精氨酸残留量的测定方法，其特征在于所述的供试品的制备：将鲑鱼促性腺激素释放激素类似物水解获得。

6.根据权利要求5所述的一种鲑鱼促性腺激素释放激素类似物中L-精氨酸残留量的测定方法，其特征在于供试品水解温度为110℃，水解时间为4小时。

7.根据权利要求6所述的一种鲑鱼促性腺激素释放激素类似物中L-精氨酸残留量的测定方法，其特征在于所述的供试品的制备：称取鲑鱼促性腺激素释放激素类似物适量，用6mol/L的盐酸溶液溶解并稀释置2ml安瓿中，一边旋转一边抽尽安瓿内的空气，并火焰熔封，把熔封后的安瓿置恒温干燥箱中，110℃水解4h，取出安瓿，放冷后即得衍生前供试品。

8.根据权利要求1所述的一种鲑鱼促性腺激素释放激素类似物中L-精氨酸残留量的测定方法，其特征在于所述的供试品鲑鱼促性腺激素释放激素类似物的制备通过氨基酸拼接、裂解、沉淀干燥得到鲑鱼促性腺激素释放激素类似物粗品，再对粗品进行纯化、转盐、冷冻干燥、成品分装，得到鲑鱼促性腺激素释放激素类似物。

9.根据权利要求8所述的一种鲑鱼促性腺激素释放激素类似物中L-精氨酸残留量的测定方法，其特征在于所述的供试品鲑鱼促性腺激素释放激素类似物是由如下制备方法制备得到：

（1）Fmoc-Pro-CTC树脂的制备；

（2）Fmoc-Leu-Pro-CTC树脂的制备；

（3）Fmoc-Trp(Boc)-Leu-Pro-CTC树脂到pGlu-His（Trt）

-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Leu-Pro-CTC树脂的制备；

（4）pGlu-His（Trt）-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-

Leu-Pro-OH的制备（树脂切割）；

（5）Pyr-His（Trt）-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-

Leu--Pro-NHEt的制备；

（6）Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Arg-Trp-Leu-Pro-NHEt的制备；

（7）纯化工艺；

（8）转盐工序；

（9）冷冻干燥、分装即得。