[发明专利]脂肪酶Sv-lip5及其在水解虾青素酯中的应用

说明书

本发明公开了一种脂肪酶Sv‑lip5及其在水解虾青素酯中的应用，属于功能酶筛选技术领域，脂肪酶Sv‑lip5的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。编码脂肪酶Sv‑lip5的基因，核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。所述脂肪酶Sv‑lip5在水解虾青素酯或制备游离虾青素中的应用。本发明还提供了一种水解虾青素酯或制备游离虾青素的方法。本发明还提供了包含编码脂肪酶Sv‑lip5的基因的重组表达载体和重组工程菌。本发明的脂肪酶Sv‑lip5具有虾青素酯水解活性，可将虾青素酯中的酯键断裂，实现游离虾青素的高效制备，解决现有酶催化效率不高的技术问题，本发明对虾青素酯的工业应用具有重要意义。

技术领域

本发明涉及一种脂肪酶Sv-lip5，及其在水解虾青素酯中的应用，属于功能酶筛选技术领域。

背景技术

游离虾青素是一种脂溶性酮式类胡萝卜素，具有强大的抗氧化、抗炎和免疫调节等作用，在治疗心脑血管疾病、糖尿病、癌症和免疫系统疾病等方面具有巨大的应用潜力。

虾青素在自然界中的主要存在形式是与脂肪酸结合构成的脂肪酸酯，脂肪酸的多样性导致虾青素酯的构成较为复杂，并且虾青素酯的低水溶性、低生物利用度也限制了其在食品行业中的应用。大多数动物体内不能合成虾青素，只能从食物等其他途径获得。因此需要将虾青素酯水解成虾青素进行多方面的应用。常用于水解虾青素酯的方法有皂化法和酶解法，皂化法需要用到氢氧化钠等强碱试剂，利用脂肪酶的催化活性，同样可以高效制备游离虾青素，且反应过程温和。

酶解法可以直接对来源广泛的含有虾青素酯物质进行处理，且水解反应在水相体系中即可进行，反应过程除提取产物外不涉及毒性试剂，因此可将此方法用于虾青素的定性及定量测定。目前的报道中，大部分研究使用商业化酶，或者使用不同表达系统得到的脂肪酶进行虾青素酯的水解，但这些酶催化效率不高，使用胞外粗提物催化的效率最高，但是铜绿假单胞菌的生物安全性不明，难以用于工业生产。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种新的脂肪酶——脂肪酶Sv-lip5，利用该脂肪酶的水解活性催化虾青素酯水解，可以实现游离虾青素的高效制备，为本研究领域提供更多的参考，也为工业应用提供更多的选择。

本发明是通过以下技术方案实现的：

脂肪酶Sv-lip5，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

脂肪酶Sv-lip5的氨基酸序列如下所示（如SEQ ID NO:1所示）：

VHGRAGPRRARGRAGPDQGRQGRAKVEQGPFQLDQGPCTAEKRQRVEPRRTTVGAARSAAEESSLFGHPEAAPDTTAAYGPDQDQVVDFYAPRGPGAAPGTPLVVVVHGGAWRARYDRRHISPFAAFLAGRGFAVASVEYRRGDGGRGAGRWPDTFDDVAAAFDALPELAAGAVPEADPGRTVLTGHSAGGHLALWAAARHVLPAGSPWRLPEAPAVRGVVALAPIADFATSAELNVCDGAFTQLLGEEHEERLAHADLTALLPTGIATTLVQGTDDAEVPPAVAEAYADAATAAGETPGFTLVDGVGHFPLIDPASAACALVAEEIAQLAW。

编码上述脂肪酶Sv-lip5的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

所述脂肪酶Sv-lip5在水解虾青素酯或制备游离虾青素中的应用。

一种水解虾青素酯或制备游离虾青素的方法：利用上述脂肪酶Sv-lip5水解虾青素酯，得到游离虾青素。

进一步地，所述水解的具体条件为：向虾青素酯溶液中加入脂肪酶Sv-lip5，在25～50℃、pH值8.0～10.0下水解。

更进一步地，水解时向虾青素酯溶液中加入乙醇，乙醇与虾青素酯溶液的体积比优选为1:12。