[发明专利]一种芸薹根肿菌的接菌方法及其在筛选抗根肿病育种材料中的应用

说明书

本发明公开了一种芸薹根肿菌的接菌方法及其在筛选抗根肿病育种材料中的应用，属于十字花科抗病育种领域。所述接菌方法包括：催芽、催芽期管理、定植、定植后管理、发病调查、抗病性调查以及依据抗病性调查分级标准对各植株进行分级；催芽是用根肿菌悬浮液感染种子，每个培养皿中1‑300粒所述种子添加所述根肿菌悬浮液2‑5mL，25℃恒温条件催芽。该接菌方法可以保证每一个植株的根系都能充分的与菌液接触，接菌成功率达到100％；还能明显缩短抗病性调查所需要的时间，在能保证接菌稳定性的前提下极大提高了抗病性材料筛选的效率，还为抗病抗病性材料筛选提供了新的接菌方法，缩短了抗病性材料筛选的时间，利于加快抗病育种的进程。

技术领域

本发明涉及十字花科抗病育种领域，特别是涉及一种芸薹根肿菌的接菌方法及其在筛选抗根肿病育种材料中的应用。

背景技术

根肿病是威胁十字花科植物的一种世界性土传病害，该病是由芸薹根肿菌(Plasmodiophora brassicae Woronin)侵染十字花科根部，引起薄壁组织细胞大量分裂增殖且增大，进而根部逐渐形成肿瘤。根肿病专性寄生十字花科，国内主要种植的十字花科作物为大白菜，小白菜，结球甘蓝，萝卜，菜心等，根肿病的发生对十字花科作物造成非常严重的危害。目前，国内外对根肿病的研究越来越多，无论是抗病育种，还是根肿菌接菌方法及抗病性的鉴定。国内外已报道的接菌方法包括菌土法、灌根法、插入法、浸根法、蘸根法等，但到目前为止尚未形成一个统一、高效的十字花科作物根肿菌接菌方法。

经过前人多次的试验验证，以上接菌方法均有效，但是接菌效果不稳定，重复性不高，不具可比性，从而导致试验结果及植物抗性评价等差异显著。菌土法、注射法发病慢，浪费菌液，但发病较均匀，发病指数高；浸根法、虽操作简单，但发病指数低。柴阿丽在十字花科根肿病接菌技术及发病条件研究使用了浸根法，发现该方法方便快捷，节省菌液用时短，效果好，发病快，但容易造成死苗。在相同的条件下用同一浓度的菌液发病率和发病指数随处理时间的增长而加大。此外，根肿菌的接菌浓度是制约接菌成功与否的关键因素，浓度过低则选择压力达不到，侵染根部的根肿菌数达不到发病要求，而浓度过高选择压力过大，侵染根部的孢子数量过多，繁殖过快，使植株根部很快变成肿瘤使根部腐烂，而影响鉴定结果。发病率在一定范围内随接菌孢子浓度的增大而增大，但孢子浓度达到一定时发病率反而下降。

根肿病的大面积流行对国内大白菜的安全生产构成了严重威胁。面对国内大白菜根肿病发病区域日益扩大的严峻形势，现有的生物防治、化学防治、农业防治措施，虽然可以在一定程度上减轻根肿病的危害，但同时存在土壤、环境污染，生产成本高等诸多问题，仍不能从根本上解决大白菜栽培所面临的严重问题。抗病育种是防控根肿病危害最经济且安全有效的途径，这就需要建立一种芸薹根肿菌稳定、高效的接菌方法及其在抗病育种材料筛技术，服务于大白菜抗病新品种的选育。加速抗病新品种的培育，减少根肿病危害地区的经济损失，提高经济效益。

发明内容

本发明的目的是提供一种芸薹根肿菌的接菌方法及其在筛选抗根肿病育种材料中的应用，以解决上述现有技术存在的问题，该方法可以达到接菌成功率100％，并且还缩短了材料筛选的时间，加速了抗病育种的进程。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种芸薹根肿菌的接菌方法，包括：催芽、催芽期管理、定植、定植后管理、发病调查、抗病性调查以及依据抗病性调查分级标准对各植株进行分级；

其中，所述催芽是用根肿菌悬浮液感染种子，每1-300粒所述种子添加所述根肿菌悬浮液2-5mL，25℃恒温条件催芽。

优选的是，所述催芽的具体操作步骤包括：培养皿中放置双层滤纸，所述滤纸用所述根肿菌悬浮液湿润，然后在所述滤纸上放上所述种子进行催芽。

优选的是，所述种子为十字花科种子。

优选的是，所述根肿菌悬浮液浓度为1×10⁶个根肿菌休眠孢子/mL。