[发明专利]马乳酪蛋白小分子肽在制备二肽基肽酶Ⅳ抑制剂中的用途

说明书

本发明公开了一种小分子肽的新用途，即马乳酪蛋白小分子肽在制备二肽基肽酶Ⅳ抑制剂中的应用，所述小分子肽的氨基酸序列为Pro‑Gln‑Pro‑Ile‑Glu‑Arg‑Thr，分子量为839.95 Da；本发明小分子肽具有二肽基肽酶Ⅳ抑制活性，对二肽基肽酶Ⅳ的抑制率为86%，半抑制浓度（IC₅₀）为0.726 mg/mL；且能改善高糖诱导的（人肝癌）Hepg2细胞胰岛素抵抗，显著提高Hepg2细胞活性，改善Hepg2细胞的葡萄糖消耗与葡萄糖摄取；本发明小分子肽可应用于制备治疗或辅助治疗2型糖尿病的功能食品、保健品和药物，且制备简单，适用于工业化生产和市场推广应用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种马乳酪蛋白小分子肽在制备二肽基肽酶Ⅳ抑制剂中的应用。

背景技术

糖尿病是胰岛素分泌减少、或胰岛素作用缺陷、或两者同时存在而造成血糖升高、脂肪代谢紊乱等诱发的代谢疾病。糖尿病成为全球关注的健康问题，90％以上的糖尿病患者患有2型糖尿病（Type2 Diabetes Mellitus，T2DM）。目前已有多类降血糖药物，例如DPP-4抑制剂类、α-葡萄糖苷酶抑制剂类、胰高血糖素样肽-1受体激动剂类等，但这些药物长期服用对人体有副作用。因此人们越来越倾向于预防保健和食疗，而来源于食品且无副作用的乳源二肽基肽酶Ⅳ抑制剂、α-葡萄糖苷酶抑制剂等在国内具有巨大的潜在市场，具有副作用小、成本低等优点。乳源中马乳的营养物质含量较高且不含或少含β-乳球蛋白，因此过敏性较低，易消化、吸收和代谢。

发明内容

本发明提供了一种小分子肽的新用途，其来源于马乳酪，该小分子肽的氨基酸序列为Pro-Gln-Pro-Ile-Glu-Arg-Thr，分子量为839.95Da，其具有二肽基肽酶Ⅳ抑制活性。

本发明所述抑制二肽基肽酶Ⅳ活性的成分（或有效成分）为上述小分子肽，还可以加入一种或多种药物或食品上可接受的辅料，如制成胶囊或丸剂、粉剂、片剂、粒剂、口服液和注射液等，即制成药剂学上适宜的使用剂型，或食品领域适宜的食用方式；可应用于制备治疗或者辅助治疗2型糖尿病的功能食品、保健品和药物。

本发明目的通过如下方案实现：

（1）马乳酪蛋白的获取：鲜马乳在4~10℃、2000~12000g下离心1~15min脱脂，脱脂马乳在20~50℃水浴中用HCl调pH至1.5~8.5，然后2000~12000g离心1~15min，取沉淀用冻干机冷冻干燥，收集冻干粉；

（2）菌种活化：将酵母菌接种至YPD液体培养基中，在25~40℃、50~300rpm下培养6~48h，连续增殖2~4代，接种量为体积百分比0.1~5%，活化后菌液的活菌数不少于10⁸CFU/mL，备用；所述酵母菌为单孢酿酒酵母、乳酸克鲁维酵母、酿酒酵母、毕赤酵母中的一种或几种；

（3）马乳酪蛋白的发酵：将步骤（1）马乳酪蛋白冻干粉用蒸馏水配成溶液后，在60~150℃灭菌1~30min，降至室温后接种活化好的酵母菌，接种量为0.1~5%，进行发酵；发酵条件为20～40℃、摇床转速为50~300rpm、发酵时间为12~100h；

（4）发酵产物的酶解：将发酵液pH调至1~9，添加蛋白酶，蛋白酶的添加量为质量比2~10%，在20~60℃反应0.5~126h；所述蛋白酶为胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、弹性蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶等的一种或几种，均为常规市售蛋白酶；

（5）酶解结束后，将发酵酶解液pH调至1.5~9.5，用不同截留分子量的截留超滤膜对溶液进行分离，获得不同组分的液体，用冻干机冷冻干燥，收集冻干粉；