[发明专利]一种新型脂肪酶AjLip970及其应用

说明书

本发明公开了一种新型脂肪酶AjLip970及其应用，所述脂肪酶AjLip970的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述脂肪酶AjLip970具有催化油脂降解的功能；编码所述脂肪酶AjLip970的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。并且本发明构建了含有AjLip970基因的重组载体pET22b‑AjLip970，将其在原核宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3)中表达，实验证明，所述基因在原核宿主细胞中表达后，获得的纯化脂肪酶具有高效催化酯类底物水解的活性，在餐厨废油的无害化处理和资源化利用领域具有巨大的应用潜力。

技术领域

本发明涉及基因工程和酶工程领域，涉及一种具有高催化活性脂肪酶功能的基因。

背景技术

脂肪酶具有广泛的工业用途，在洗涤、制革、医药、功能性油脂生产、及生物柴油方面有极大的应用价值和广阔的前景。微生物脂肪酶因其pH和底物适应范围大等优点使得它占据了脂肪酶市场的绝大部分，2018年微生物脂肪酶市场使用量为4.25亿美元，到2023年预计将达到5.902亿美元，从2018年起以6.8％的复合年增长率增长。脂肪酶使用场景和市场的不断扩大和增长，促进了脂肪酶在菌株分离、脂肪酶异源高效表达以及脂肪酶固定化等方面的相关研究。

近年来关于不动杆菌脂肪酶的研究报道相对较少，特别是新型的、具有高效活性的不动杆菌脂肪酶的研究报道更是少见，而不动杆菌脂肪酶具有pH稳定性高，底物选择性较低的优点是工业微生物脂肪酶的重要来源。本发明发现的来源于菌株Acinetobacterjunii WCO-9(GDMCC No：61851)的基因，其编码的脂肪酶AjLip970是一种新型、高效的细菌来源脂肪酶，具有广阔的应用前景。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种新型脂肪酶AjLip970，所述脂肪酶AjLip970的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述脂肪酶AjLip970具有催化油脂降解的功能。

本发明还提供一种编码如上所述脂肪酶AjLip970的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明还提供一种含上述的基因的重组载体。

本发明还提供一种如上所述的重组载体在培育产脂肪酶微生物中的用途。

本发明还提供一种由上所述的重组载体转化得到的重组工程菌株。

优选的是，将重组载体转入原核宿主细胞大肠杆菌中，获得重组工程菌株。

本发明还提供一种如上所述的重组工程菌株在培育产脂肪酶微生物中的用途。

优选的是，诱导表达发酵后产生脂肪酶，经亲和层析纯化获得纯蛋白，在催化不同链长对硝基苯酯中的应用。

优选的是，重组工程菌株经诱导，脂肪酶基因AjLip970在重组工程菌株中能够大量表达；经细胞破碎离心收集上清液，通过目的蛋白His标签与Ni-NTA树脂的特异性吸附纯化脂肪酶。

本发明还提供一种如上所述的新型脂肪酶AjLip970在催化油脂降解工业中的应用。

本发明至少包括以下有益效果：本发明基因编码的脂肪酶AjLip970氨基酸序列在NCBI数据库中一致性最高为90.76％，鉴定为一种新型脂肪酶；本发明构建了含有AjLip970基因的重组载体pET22b-AjLip970，将其在原核宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3)中表达，实验证明，所述基因在原核宿主细胞中表达后，获得的纯化脂肪酶具有高效催化酯类底物水解的活性，在餐厨废油的无害化处理和资源化利用领域具有巨大的应用潜力。

本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。