[发明专利]一种人类疱疹病毒7型的MNP引物组合物、试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种人类疱疹病毒7型的MNP引物组合物、试剂盒及其应用。所述引物包括5对引物中的至少一对，每对所述引物对均包括正向引物和反向引物，引物序列如SEQ ID NO.6～SEQ ID NO.15所示。所述引物特异的鉴定HHV‑7的5个MNP分子标记，是指在HHV‑7基因组上筛选的区分于其他物种且在物种内部具有多个核苷酸多态性的基因组区域。所述引物互不干扰，可一次性对多样本的所述MNP标记进行序列分析，用于HHV‑7的特异鉴定，遗传变异检测和指纹数据库构建；包含了所述引物的所述试剂盒对HHV‑7具有免培养、高通量、多靶点、高灵敏、免培养的检测优势，对HHV‑7的科研和防疫监测均具有重要意义。

技术领域

本发明实施例涉及生物技术领域，特别涉及一种人类疱疹病毒7型即HHV-7的MNP引物组合物、试剂盒及其应用。

背景技术

疱疹病毒生物分类归属于疱疹病毒科，有分α、β、γ三个亚科，分别称之α疱疹病毒、β疱疹病毒和γ疱疹病毒，存在于人和动物体内，与人类感染有关者包括:α疱疹病毒(单纯疱疹病毒、水痘-带状疱疹病毒)；β疱疹病毒(巨细胞病毒、人疱疹病毒6型即HHV-6和7型即HHV-7)和γ疱疹病毒(EB病毒、人疱疹病毒8型即HHV-8)。不同亚科的疱疹病毒感染特性不同，比如，α疱疹病毒其宿主范围广，复制周期短，繁殖速度快，是一类溶细胞性感染的病毒，多潜伏在感觉神经节内；β疱疹病毒的宿主范围窄，在细胞培养中复制缓慢，繁殖周期长，受感染细胞变大形成巨细胞，病毒在淋巴细胞内潜伏感染，也可潜伏于分泌腺、肾脏或其他组织；γ疱疹病毒主要感染B淋巴细胞并长期潜伏，大多不引起溶细胞性病变。

现有的筛查技术是通过镜检、分离培养、免疫学检测或经DNA探针进行原位杂交，在检测周期、复杂度、交叉反应、检测变异、准确性、灵敏度等方面存在一个或多个局限，病毒的分离培养尤其困难，现有技术难以特异鉴定一种疱疹病毒，因此，开发每种疱疹病毒特异的检测技术，包括分子标记、引物和试剂盒等，实现特定疱疹病毒的精准特异检测，成为亟待解决的问题。

发明内容

本发明目的是提供一种鉴定人类疱疹病毒7型(HHV-7)的分子标记、引物组、试剂盒及应用，可以对HHV-7进行定性鉴定和变异检测，具有高通量、高准确、高特异、高灵敏的效果。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

在本发明的第二方面，提供了一种鉴定(HHV-7)的引物组合物，所述多重PCR引物组合物包括5对引物对中的至少一对。每个MNP标记的引物包括正向引物和反向引物。在本发明的另一方面，提供了一种用于鉴定HHV-7试剂盒，所述试剂盒包括所述的引物组合物。

进一步地，所述试剂盒还包括多重PCR预混液。

又一方面，本发明实施例提供了一种引物组的应用，所述应用包括：利用所述引物组对HHV-7基因组上的5个MNP标记中的至少一个进行检测，根据获得的MNP标记的序列进行非诊断目的的HHV-7的定性鉴定、HHV-7内部的遗传变异鉴定、HHV-7毒株间的遗传变异鉴定、MNP指纹数据库的构建，所述5个MNP标记的序列如序列表中SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.5所示。

MNP标记是一种新型分子标记，是指在基因组上一段区域内由多个核苷酸引起的多态性标记。与SSR标记和SNP标记相比，MNP标记具有以下优势：(1)等位基因丰富，单个MNP位点上有2ⁿ种等位基因，高于SSR和SNP，适用于群体生物的鉴定；(2)物种区分能力强，只需要少量的MNP标记就能实现物种鉴定，减少了检测错误率。

鉴于以上优点和特性，MNP标记及检测MNP标记的技术可实现群体生物多等位基因型的分类与溯源，在病原微生物的鉴定、指纹数据库构建、遗传变异检测等方面都具有应用潜力。本发明在HHV-7领域属于首创，并未见相关文献报道；本发明实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：