[发明专利]一种诱导结肠癌高频转移的黑腹果蝇模型的建立方法

权利要求书

1.一种诱导结肠癌高频转移的黑腹果蝇模型的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1：将lgl^-/-UASRas^V12，FRT40A/Cyo；TM3/TM6B果蝇品系和Sp/Cyo；UASRas^V12，Sna^OE/TM3/MKRS果蝇品系进行杂交，在后代中选取基因型为lgl^-/-UASRas^V12，FRT40A/Cyo；UASRas^V12，Sna^OE/TM6B的果蝇，建成可传代保存的果蝇品系；

S2：在果蝇库中挑选基因型为：hsflp；FRT40A，tubGal80/Cyo；tubGal4，UASGFP/TM6B的处女蝇与S1中选取的基因型为lgl^-/-UASRRas^V12，FRT40A/Cyo；UASRas^V12，UASSna^OE/TM6B的雄性果蝇进行杂交，在后代中选取基因型为hsflp；lgl^-/-UASRas^V12，FRT40A/FRT40A，tubGal80；UASRas^V12，UASSna^OE/tubGal4，UASGFP的雌性成虫作为正确基因型果蝇，其外观表型为平翅，肩毛数目正常；

S3：将羽化后2-3天的正确基因型果蝇在37℃水浴热激诱导1小时，后置于25℃恒温恒湿光照培养箱中培养3-7天，头部或胸部具有GFP的果蝇即为诱导结肠癌高频转移的黑腹果蝇模型。

2.根据权利要求1所述的一种诱导结肠癌高频转移的黑腹果蝇模型的建立方法，其特征在于，所述S1中，lgl^-/-UASRas^V12，FRT40A/Cyo；TM3/TM6B果蝇品系和Sp/Cyo；UASRas^V12，Sna^OE/TM3/MKRS果蝇品系进行杂交时亲本雌雄任意组合均可。

3.根据权利要求1所述的一种诱导结肠癌高频转移的黑腹果蝇模型的建立方法，其特征在于，所述S3中，在热激诱导正确基因型果蝇形成肿瘤的1-2天后，在荧光显微镜下GFP所标记的肿瘤细胞局限于腹部，诱导6-8天后，20-30％的正确基因型果蝇中GFP阳性的肿瘤细胞异位出现在胸腔及脑部区域。

4.根据权利要求3所述的一种诱导结肠癌高频转移的黑腹果蝇模型的建立方法，其特征在于，所述S3中，培养箱中培养的条件为：温度20-30℃恒温，湿度50％-60％；培养过程中所用的培养基的配方比为白糖100g：玉米粉320g：黄豆粉40g：红糖糖浆260g：琼脂40g：酵母粉72g：水5L。

5.根据权利要求4所述的一种诱导结肠癌高频转移的黑腹果蝇模型的建立方法，其特征在于，所述S3中，含有两个UASRas^V12转基因，一个转录因子Sna的过表达，以及一个lgl缺失突变，通过MARCM技术在小肠干细胞中进行诱导，促进肿瘤干细胞克隆性的生长和转移。

6.根据权利要求1所述的一种诱导结肠癌高频转移的黑腹果蝇模型的建立方法，其特征在于，所述S2中，将果蝇在通有CO₂的平板上麻醉后，再进行雌雄挑选、杂交和观察表型的操作。

7.根据权利要求6所述的一种诱导结肠癌高频转移的黑腹果蝇模型的建立方法，其特征在于，所述S2中，处女蝇选取方法为将原种瓶中的成虫全部清除，此后每隔8小时收集刚羽化的，表型身体细长幼嫩透明的，同时能够看到腹腔内消化道的黑色食物残渣的雌性个体即为处女蝇。

8.根据权利要求5所述的一种诱导结肠癌高频转移的黑腹果蝇模型的建立方法，其特征在于，所述S3中，将表现为无GFP的果蝇作为既不诱发肿瘤原位增殖也不引起转移的对照组；将表现为腹部有GFP，而头、胸部不存在GFP的果蝇作为能够诱发原位肿瘤但未转移的对照组。