[发明专利]一种人脑胶质瘤细胞系及其构建原位移植模型的方法和应用

说明书

本发明公开了一种人脑胶质瘤细胞系及其构建原位移植模型的方法和应用，首次公开了人脑胶质瘤细胞Glioma‑RP，于2021年11月2日将其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C202179。该人脑胶质瘤细胞Glioma‑RP能够大量扩增，细胞性状稳定，能够在体外传代培养，且可以稳定多次传代。本发明公开的人脑胶质瘤小型猪移植模型是将人胶质瘤细胞系移植于裸鼠形成实体瘤后进行组织块移植，避免直接使用人的肿瘤细胞移植小型猪，会因为小型猪自身的免疫反应将人肿瘤细胞排斥；同时进一步通过体内筛选获取适应猪体内生长的胶质瘤细胞，从而，提升肿瘤的异种移植成功率。

技术领域

本发明属于实验动物技术领域，涉及人脑胶质瘤小型猪原位移植模型的建立，具体涉及一种人脑胶质瘤细胞系及其构建原位移植模型的方法和应用。

背景技术

胶质瘤是最常见的恶性脑肿瘤，占恶性原发性中枢神经系统(CNS)肿瘤的80％。恶性脑胶质瘤的治疗是一个世界性难题，其治疗效果差的关键问题在于恶性的胶质细胞瘤细胞分化不全且深入神经细胞深处，手术不可能全部切除。研究表明,尽管恶性脑胶质瘤中心坏死组织的血脑屏障(Blood-Brain-Barrier, BBB)已遭破坏，但肿瘤边缘部分BBB仍完整。BBB的存在使药物利用率降低,影响了化疗药物的疗效，故恶性脑胶质瘤复发率极高，预后最差的是多形性胶质母细胞瘤(GBM)，其中位生存时间为14.6个月，只有26.5％的患者存活持续2年。神经胶质瘤的浸润性不可避免地导致所有肿瘤细胞的手术切除不完全，迫切需要更有效的肿瘤特异性疗法。因此，建立有效、稳定的脑胶质瘤动物模型对其治疗研究具有重要意义。

通常建立肿瘤移植模型的方法是采用小鼠或者大鼠来源的细胞系进行原位移植或者选取裸鼠移植人的肿瘤细胞。前者的鼠源性细胞系与人体存在很大差别，后者裸鼠体型较小并且生存期短，在建立模型之后进行肿瘤干预性治疗窗口期短，动物实验操作和饲养要求严格。既往的研究成果是以大、小鼠为实验对象获得的，而人体脑组织结构和颅骨厚度与小动物相比差异较大，故不能将其效应及参数推及到人。

小型猪体型适中，与人体较为接近，猪在解剖、组织和生理生化等许多生物学指标上与人类非常相似，被认为是研究人类疾病最合适的实验动物模型，特别在肿瘤相关的代谢、影像和治疗研究的理想动物模型。在肿瘤动物模型方面，小型猪的应用相对较少，目前国内外报道主要集中皮肤和色素瘤模型，不同来源和遗传背景的小型猪可自发皮肤黑色素瘤。但该类模型发生比率不宜控制，时间长，个体差异大，短期内很难获取大量肿瘤学资料。为此，越来愈多的研究关注小型猪的异种移植模型。同时，建立小型猪人胶质瘤异种移植模型，还必须解决猪本身对人体组织细胞的免疫排斥反应问题，即必须选择合适的免疫抑制剂确定相应的剂量，使其能够通过BBB达到免疫抑制的效果，也能确保动物长期存活。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种人脑胶质瘤细胞系及其构建原位移植模型的方法和应用。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明公开了一种人脑胶质瘤细胞系，该人脑胶质瘤细胞系命名为人脑胶质瘤细胞Glioma-RP，于2021年11月2日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C202179。

本发明还公开了上述的人脑胶质瘤细胞系的子代细胞系。

本发明还公开了上述的人脑胶质瘤细胞系或子代细胞系在制备人脑胶质瘤的细胞/动物模型中的应用。

本发明还公开了上述的人脑胶质瘤细胞系或子代细胞系在研究人脑胶质瘤发生、发展、转移机理中的应用。

本发明还公开了上述的人脑胶质瘤细胞系或子代细胞系在筛选治疗人脑胶质瘤的药物中的应用。

本发明还公开了上述的人脑胶质瘤细胞系或子代细胞系在研究人脑胶质瘤的耐药机理中的应用。

本发明公开了上述的人脑胶质瘤细胞系的建立方法，包括以下步骤：