[发明专利]一种耐盐多倍体苹果砧木的诱导方法

说明书

本发明涉及苹果组组织培养技术领域，具体涉及一种耐盐多倍体苹果砧木的诱导方法。包括以下步骤：取在继代培养基中生长45±2天的苹果组织培养苗的叶片，将叶片远轴面朝上置于含有DMSO和秋水仙素的诱导培养基上诱导培养，时间2‑3d；所述诱导培养基以再生培养基为基础培养基，添加质量百分比浓度为1‑3％的DMSO和0.05‑0.10％的秋水仙素。本发明的研究结果证实，DMSO和秋水仙素可协同配合提高富平楸子的多倍体诱导率，得到的多倍体富平楸子的耐盐性显著提高，研究成果对于开展苹果耐盐砧木定向育种具有重要的理论意义和实际应用价值。

技术领域

本发明涉及苹果组组织培养技术领域，具体涉及一种耐盐多倍体苹果砧木 的诱导方法。

背景技术

苹果是世界上最重要的水果之一，苹果的生产很大程度上依赖于接穗品种 嫁接的砧木。作为一种重要的经济果树，它的生产也受到各种环境胁迫(干旱、 低温、盐碱等)的影响。虽然在很多报道中说明染色体加倍在耐盐性方面发挥 着重要作用，但经检索，未发现利用秋水仙素加DMSO诱导多倍体培育耐盐苹 果砧木品种的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种耐盐多倍体苹果砧木的诱导方法，弥补现有技 术的空白。

本发明采用如下技术方案：

一种耐盐多倍体苹果砧木的诱导方法，包括以下步骤：

取在继代培养基中生长45±2天的苹果组织培养苗的叶片，将叶片远轴面 朝上置于含有DMSO和秋水仙素的诱导培养基上诱导培养，时间2-3d；所述诱 导培养基以再生培养基为基础培养基，添加质量百分比浓度为1-3％的DMSO 和0.05-0.10％的秋水仙素。

进一步的，所述苹果为富平楸子。

更进一步的，诱导培养前，叶片进行如下处理：在叶背处的叶脉上横切4-5 刀，然后用滤纸吸干多余水分。

更进一步的，诱导培养的培养温度为23-27℃，光照时间为13h/d，光照强 度为2000lx。

更进一步的，所述再生培养基为含有0.2mg/L TDZ、30g/L蔗糖、1mg/L NAA、5mg/L6-BA和0.8％琼脂的MS培养基，pH＝5.8。

更进一步的，将诱导后的叶片从诱导培养基中取出，再接种到所述再生培 养基中，暗培养4周后，进行光培养，培养温度为23-27℃，光照强度为2000lx。

本发明具有以下有益效果：

1、本发明利用不同浓度的DMSO、秋水仙素，不同的诱导天数诱导叶片 和茎段，并利用多倍体富平楸子盐胁迫处理下的表型比较和生理参数测定，详 细鉴定了染色体加倍植物耐盐性的生物学功能，获得的研究成果对于开展苹果 耐盐砧木定向育种具有重要的理论意义和实际应用价值。

2、本发明诱导的富平楸子染色体加倍，能降低盐胁迫下多倍体植物的钠含 量，提高多倍体植物的抗氧化酶活性和植物激素(JA、ABA、GAs)含量，从 而提高多倍体植物的耐盐性，在提高植株耐盐的染色体工程育种方面有重要的 参考价值。

附图说明

图1为本发明秋水仙素诱导富平楸子后气孔观察和对比；

其中，图a和b为二倍体和拟多倍体富平楸子气孔大小和气孔密度比对， 图c、d、e、f为二倍体和拟多倍体富平楸子气孔长度、宽度、开长度和密度比 对。

图2为二倍和多倍体富平楸子叶片细胞核DNA相对含量比对。

其中图a为二倍体，图b、c、e为四倍体，图d、f为非整倍体。

图3为盐胁迫下多倍体富平楸子的表型分析。