[发明专利]一种蝉棒束孢孢子粉的保藏方法

说明书

本发明公开了一种蝉棒束孢孢子粉的保藏方法，属于微生物菌种保藏技术领域。该方法包括以下步骤：获取蝉棒束孢的孢子粉，将所述蝉棒束孢以孢子粉形式密封保藏于‑80℃超低温或4℃低温下。本发明以孢子粉的形式保藏蝉棒束孢，将孢子粉置于不同温度环境中，检测时间周期等保藏条件，结合菌丝生长、孢子萌发、菌悬液中菌丝体生物量及其对柞蚕蛹的侵染能力等标准进行评定，最终得到将孢子粉保藏于‑80℃超低温或4℃低温下，可以保持活性超过24个月，且具有侵染昆虫的活性，是进行长期保藏的最佳方案，这为填补蝉棒束孢的菌种保藏领域的技术空白，以及提供优质、稳定的蝉棒束孢种质资源具有重要意义。

技术领域

本发明涉及微生物菌种保藏技术领域，特别是涉及一种蝉棒束孢孢子粉的保藏方法。

背景技术

蝉棒束孢(Isaria cicadae)属于子囊菌门、粪壳菌纲、肉座菌目、虫草科、棒束孢属的真菌。从古至今，多数医药典籍广为承认的名称唯有“蝉花”之名，且其能最准确而形象地概括了这种虫草的特征，是我国一种传统珍贵中药材，使用历史悠久。蝉棒束孢相比冬虫夏草的生长环境而言，分布较为广泛，主要出现在我国长江以南，包括四川、江苏、浙江、福建、安徽、广东和云南等省份。野生及人工培养的蝉棒束孢均具有丰富的营养成分，从中可以分离提取出许多有利于人体健康的活性成分如氨基酸、腺苷、麦角甾醇以及虫草素等。

蝉棒束孢的人工培养技术及生防作用等方面研究已经广泛开展。但在生产实践中，栽培技术人员遇到的一个普遍性的难题是人工分离的菌种在培养基上容易发生生产性状的变异，即通常所说的菌种退化现象，并且退化的菌种的侵染能力会有所下降，且蝉棒束孢具有高安全性、产孢量大的优势，是一种广谱并对害虫有较高致病力的虫生真菌很适合做杀虫剂来防治有害昆虫，但蝉棒束孢的孢子制剂像其它生防真菌一样，由于击倒害虫速度较慢、对湿度的依赖性、孢子不耐贮存等限制性因素，使其在生产应用上受到很大的限制。因此通过保藏手段使孢子能够有效储藏并提高其侵染能力显得尤为重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种蝉棒束孢的孢子粉的保藏方法，以解决上述现有技术存在的问题，通过以孢子粉形式保藏蝉棒束孢的菌种，在-80℃和4℃冷藏条件孢子可保持活性超过24个月，且具有侵染昆虫的能力，是适合长期保藏蝉棒束孢菌种的优质保藏方法。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种蝉棒束孢孢子粉的保藏方法，包括以下步骤：

获取蝉棒束孢的孢子粉，将所述蝉棒束孢以孢子粉形式密封保藏于-80℃超低温或4℃低温下。

优选的是，获取蝉棒束孢的孢子粉的方法包括以下步骤：

(1)将所述蝉棒束孢接种固体改良马铃薯葡萄糖培养基上，培养至长出菌丝；所述固体改良马铃薯葡萄糖培养基包括以下重量份组分：马铃薯200份、葡萄糖20份、蛋白胨3份、七水硫酸镁1份、磷酸二氢钾2份、维生素B 0.025份、琼脂16份以及水1000份；

(2)将所述菌丝和孢子转至液体改良马铃薯葡萄糖培养基，培养获取菌悬液；所述液体改良马铃薯葡萄糖培养基为所述固体改良马铃薯葡萄糖培养基中不添加琼脂；

(3)将所述菌悬液接种于小麦培养基，培养后获取蝉棒束孢的孢子粉；所述小麦培养基包括以下重量份的组分：小麦15份和液体改良马铃薯葡萄糖培养基22.5份。

优选的是，步骤(1)中，培养条件为23℃黑暗培养3d后，转至光照条件下继续培养，培养至菌丝生长接触培养器皿的内壁。

优选的是，步骤(2)中，培养条件为23℃、150rpm条件下培养3d，获取菌悬液。

优选的是，步骤(3)中，培养条件为所得菌悬液按照接种量5％接种于所述小麦培养基，23℃黑暗培养3d后，再光照培养17d，然后收取蝉棒束孢的孢子粉。

本发明还提供所述的保藏方法在防止蝉棒束孢退化上的应用。