[发明专利]一种抗新冠病毒全人源广谱中和抗体ZWC12及应用

说明书

本发明公开了一种抗SARS‑CoV‑2的全人源单克隆抗体ZWC12，所述抗体具有独特的CDR分区，其抗原识别表位位于S1蛋白的RBD区。所述抗体中和新冠病毒野生型、Alpha、Beta、Gamma、Delta、Omicron变异株假病毒的EC₅₀分别是1.041、0.124、0.162、0.136、0.411、0.093μg/mL，该抗体对目前主要变异株具有广谱高效中和活性。所述抗体还具有高表达、全人源、稳定性好的特点，适合产业化生产，对于应对新冠变异株导致的爆发流行具有重要应用价值。

技术领域

本发明公开了一种抗体，属于微生物学和免疫学领域。

背景技术

新冠肺炎（COVID-19）的病原体是新型冠状病毒-2（SARS-CoV-2），SARS-CoV-2属于冠状病毒科的β-冠状病毒属，是一类有囊膜的单股正链RNA病毒，其基因组长度约为30 kb。基因组的前2/3是非结构基因ORF1a/b，主要编码与病毒复制相关的酶（RNA依赖的RNA聚合酶，RdRp），后1/3依次编码四种结构蛋白：刺突蛋白（S），包膜蛋白（E），膜蛋白（M）和核衣壳蛋白（N）。其中，S蛋白含有病毒受体结合区，可与人细胞表面的血管紧张素转换酶2（ACE2）受体结合，介导病毒吸附和进入细胞，是病毒入侵宿主易感细胞的关键蛋白。

病毒在传播过程中会不断地随机产生突变，其中有些突变会增强S蛋白与ACE2受体的结合能力，加快病毒在人群中的传播，如K417N、N501Y、E484K及P681R等。因而一些携带关键位点突变的病毒变异株表现出更强的感染能力或更强的免疫逃逸能力，使现有的公共卫生干预措施或疫苗的有效性降低，如被世界卫生组织（WHO）列为“关注变异株”（variantsof concern, VOC）的Alpha 株(B.1.1.7)、Beta株 (B.1.351)、Gamma株 (P.1)、Delta株(B.1.617.2) 和Omicron株 (B.1.1.529)等，这些变异株的出现对疫情防控提出了新的严峻挑战。

靶向病毒表面刺突蛋白（S蛋白）的单克隆中和抗体成为潜在的有效治疗新冠肺炎的手段，它通过与新冠病毒结合，抑制病毒的活性，保护细胞免受侵害。相比小分子药物和血浆疗法，单抗药物机理清晰，对靶点的选择性高、特异性强、副作用小。根据chineseantibody网站信息，已有25项靶向S蛋白的单抗进入临床研究，这些单抗对于应对野生型新型冠状病毒都是有效的。目前国外已有四种靶向S蛋白的单抗获得了美国FDA的紧急使用授权，包括再生元的单抗REGN10933和REGN10987联用，礼来的LY-COV555和LY-COV016，Vir公司的VIR-7831和阿斯利康的AZD7442；国内，腾盛华创公司的抗新冠病毒中和抗体BRII-196和BRII-198联合疗法于2021年12月8日获中国国家药品监督管理局（NMPA）应急批准。然而，随着SARS-CoV-2的不断进化和变异，研发中的大部分单抗对一种或多种变异株失去中和活性，其中，礼来研发的LY-CoV555和LY-CoV016、再生元研发的REGN10933对Beta株病毒失去中和活性, 且抗体药物LY-CoV555-LY-CoV016鸡尾酒疗法、REGEN-COV鸡尾酒疗法、AZD7442鸡尾酒疗法对Omicron株失去中和活性。为应对病毒免疫逃逸，研发具有保守中和表位的广谱单抗，包括研发广谱的中和单抗或两种高效中和单抗的组合物，具有重大临床应用价值。

当前，中和单抗可以通过杂交瘤技术，人源化转基因小鼠，噬菌体文库筛选以及单细胞PCR技术制备。单细胞PCR技术具有全人源，天然稳定性好等优点，被广泛用于新冠中和抗体的研发。单细胞PCR技术的原理是新型冠状病毒感染恢复者或新冠疫苗接种者体内存在对抗病毒的保护性单克隆抗体，编码抗体的基因位于人体外周血单个淋巴细胞内，通过流式细胞仪分选和单细胞PCR技术可以“钓取”此基因。然后通过基因工程手段，可实现体外规模化制备此分子。

本发明拟采用流式分选-单细胞PCR技术从重组新型冠状病毒疫苗接种者的外周血中获得具有优异广谱中和活性的单抗，目的是提供针对COVID-19具有良好保护效果的全人源单克隆治疗性抗体，以应对当前流行以及将来可能出现的变异株。