[发明专利]一种评估橡胶树白粉菌遗传转化体系转化效率的方法在审
| 申请号： | 202210024889.1 | 申请日： | 2022-01-11 |
| 公开（公告）号： | CN114540402A | 公开（公告）日： | 2022-05-27 |
| 发明（设计）人： | 陈代朋;李潇;缪卫国;刘文波;林春花;李志刚 | 申请（专利权）人： | 海南大学 |
| 主分类号： | C12N15/80 | 分类号： | C12N15/80;C12N15/65;C12Q1/6897;C12N1/15;C12R1/645 |
| 代理公司： | 海南汉普知识产权代理有限公司 46003 | 代理人： | 麦海玲 |
| 地址： | 570228 海*** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 评估 橡胶树 白粉 遗传 转化 体系 效率 方法 | ||
1.一种重组质粒，其特征在于所述重组质粒包含第一酶切位点、第二酶切位点、橡胶树白粉菌编码RP60基因启动子、GUS报告基因、编码终止子基因和抗性基因，其中：
所述橡胶树白粉菌编码RP60基因启动子的序列位于GUS报告基因序列上游；
所述编码终止子基因的序列位于GUS报告基因序列下游；
所述第一酶切位点位于橡胶树白粉菌编码RP60基因启动子序列上游；
所述第二酶切位点位于编码终止子基因序列下游。
2.根据权利要求1所述的重组质粒，其特征在于所述抗性基因为氨苄青霉素抗性基因和潮霉素抗性基因。
3.根据权利要求1所述的重组质粒，其特征在于所述第一酶切位点为EcoRI和HindIII，其中：EcoRI序列为5‘-GAATTC-3’；HindIII序列为5‘-AAGCTT-3’。
4.根据权利要求1所述的重组质粒，其特征在于，所述第二酶切位点为BamHI，其中：BamHI序列为5‘-GGATCC-3’。
5.一种用于评估橡胶树白粉菌转化体系转化效率的重组丝状真菌，所述重组丝状真菌为采用权利要求1-4任意一项所述的重组质粒转化至橡胶树白粉菌而得。
6.权利要求1-4任意一项所述的重组质粒，其特征在于，应用于评估橡胶树白粉菌遗传转化体系转化效率。
7.一种评估橡胶树白粉菌遗传转化体系转化效率的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将权利要求1-4任意一项所述的重组质粒转化至橡胶树白粉菌，得到重组丝状真菌；
(2)将所述的重组丝状真菌接种至橡胶树古铜期叶片上进行培养；
(3)重组丝状真菌在橡胶树古铜期叶片上培养后喷施潮霉素B进行筛选；
(4)取发病叶片连同菌丝用GUS染色液进行染色，判断GUS报告基因是否转化成功，被染成蓝色的菌丝所对应的重组丝状真菌即为转化成功的转化子。
8.根据权利要求7所述的评估橡胶树白粉菌遗传转化体系转化效率的方法，其特征在于，步骤(2)中培养温度为25℃。
9.根据权利要求7所述的评估橡胶树白粉菌遗传转化体系转化效率的方法，其特征在于，步骤(3)具体为：重组丝状真菌在橡胶树古铜期叶片上培养24小时后喷施10ng/μL的潮霉素B，并继续在温室中培养4天。
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